Inligting

Groei gis op LB -agarplate?

Groei gis op LB -agarplate?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ek wil graag E coli -selle op sellofaan bo -op die LB -plaat laat groei, en dan gisselle op dieselfde LB -plaat laat groei. Groei (of hoe goed) gis op LB-borde? Is daar 'n komposisiemedia wat goed kan wees vir beide E. coli en gis? Het iemand hierdie eksperiment gedoen?


Nie goed nie, hulle benodig dekstrose. Gebruik YBT:

20 g Kaseïenpeptoon Tpe-M 10 g Gisekstrak 20 g Dextrose 17 g Agar

q.s. tot 975 ml in di-water.

pH tot 6,2 w 5M NaOH

q.s. tot 1L met di-water.

Outoklaaf vir 45 minute by 121C

Gee asepties in Petri -skottelgoed.

Berg by 4C vir tot 12 weke.

As jy Co-culture wil kweek, doen dit in LB aangevul met 20g/L Dex.


4.2: Gisgroeimedia

  • Bydra deur Clare M. O & rsquoConnor
  • Emeritus -medeprofessor (Biologie) aan die Boston College

Vir roetine -kultuur gebruik wetenskaplikes gewoonlik ryk media wat al die voedingstowwe verskaf wat selle benodig om te groei. Die individuele komponente van ryk media is dikwels ongedefinieerd.Gis word byvoorbeeld algemeen verbou in 'n medium wat bekend staan ​​as YPD, wat eenvoudig en goedkoop is om voor te berei. Die & ldquoY& rdquo in YPD verwys na 'n gisekstrak, wat die wateroplosbare verbindings bevat wat gegenereer word wanneer gis gedwing word om self te verteer. (Diegene van julle wat Australië besoek het, het moontlik gisekstrak in die gewilde verspreiding, Marmite, teëgekom.) Die & ldquoBl& rdquo verwys na peptoon, 'n mengsel van peptiede en aminosure wat berei word deur dierlike proteïene met proteases te verteer. Die & ldquoD& rdquo verwys na dekstrose, of glukose, wat die gunstige koolstofbron van gis is (Sherman, 2002).

Omdat YPD grootliks uit ru-ekstrakte bestaan, kan die samestelling daarvan aansienlike bondel-tot-batch variasie toon. Hierdie variasie is selde 'n probleem, omdat YPD meer as genoeg noodsaaklike voedingstowwe bevat om aan die metaboliese behoeftes van selle te voldoen. Baie eksperimente vereis egter media met 'n gedefinieer samestelling. Om aan hierdie behoefte te voldoen, het die gisgemeenskap 'n verskeidenheid sintetiese media ontwikkel. Individuele komponente van die sintetiese media kan gemanipuleer word om aan die behoeftes van 'n eksperiment te voldoen. (Later in die semester sal ons gedefinieerde media gebruik om vir spesifieke genotipes te kies.)

Gis kan verbou word in vloeibare kulture of op die oppervlak van plate wat vaste media bevat. Agar word gewoonlik gebruik om vloeibare groeimedia te stol wanneer plate voorberei word. Stamme word tipies op agarplate gehou vir gereelde gebruik. Selle groei in kolonies op plate. Die selle in 'n kolonie is geneties baie soortgelyk, indien nie identies nie, omdat hulle van dieselfde stamvadersel afkomstig is. Die meeste gisrasse kan vir etlike maande op borde in die yskas gestoor word met minimale verlies aan lewensvatbaarheid.


Hoe om LB -agarborde te maak

  1. Weeg 7,5 g agar, 5 g tryptoon, 5 g natriumchloried (NaCl) en 2,5 g gisekstrak uit en voeg by 'n 1 L Duran -bottel.
  2. Meet ongeveer 400 ml gedistilleerde water en voeg dit by die Duran -bottel.
  3. Skud die bottel om die reagense op te los.
  4. Sodra die reagense volledig opgelos is, pas die pH tot 7,0 aan met behulp van natriumhidroksied (NaOH) oplossing (1 N).
  5. Sodra die pH aangepas is, vul die oplossing op tot 500 ml met gedistilleerde water.Opsioneel: stel 'n waterbad op 55 o C.
  6. Om te steriliseer, outoklaveer die oplossing op 'n vloeistofsiklus (20 min by 15 psi).
  7. Laat die oplossing afkoel tot ongeveer 55 o C, of ​​warm genoeg om in u hand gehou te word sonder om dit te verbrand. As u nie genoeg tyd het om die temperatuur dop te hou nie, plaas die bottel in die waterbad. Dit sal verhoed dat die oplossing vroegtydig verhard word.
  8. As dit afgekoel is, voeg die toepaslike antibiotika by die oplossing en draai om om te meng.
  9. Berei petriskottels voor in 'n steriele omgewing (oppervlaktes skoongemaak met 70% etanol, ens.). Giet 'n dun laag oplossing versigtig in die petriskottels om die bodem van die bord te bedek (ongeveer 10 - 20 ml per bord). Probeer om te voorkom dat u borrels oordra of skep.
  10. Laat die borde stol voordat dit in die yskas gestoor word (sien hieronder).

Groei gis op LB -agarplate? - Biologie

Gis het eenvoudige voedingsbehoeftes. Omdat hulle nie fotosintese kan uitvoer nie, benodig hulle 'n verminderde koolstofbron, wat 'n eenvoudige verbinding as asetaat kan wees. Boonop benodig hulle ook 'n stikstofbron soos ammoniumsulfaat. Giste kan 'n verskeidenheid organiese stikstofverbindings gebruik, insluitend ureum en verskeie aminosure. Die enigste ander komplekse verbinding wat hulle benodig, is die vitamien, biotien. Natuurlik benodig hulle ook 'n verskeidenheid soute en spoorelemente.

Nog 'n kenmerk van die meeste gis, insluitend S. cerevisiae, is dat hulle verdeel deur ontluikende, eerder as deur binêre kernsplitsing (Byers 1981). ’n Klein knoppie kom uit die oppervlak van die ouersel en vergroot totdat dit amper die grootte van die ouer is.

Terwyl dit gebeur, is die chromosome van die ouer replikaat. By mitose, wanneer die kern verdeel, word een van die kerne na die knop oorgedra, en dan skei die twee selle.

Schizosaccharomyces pombe, nog 'n gewilde gis, is merkwaardig soortgelyk aan S. cerevisiae, behalwe dat dit groei as silindriese selle wat verleng en in twee geskei word deur binêre splitsing, baie soos bakterieë. Die seldeling daarvan is so gerieflik om op te let dat hierdie gis ook die potensiaal het om biologie te onderrig.

Die lewensiklus van gis, soos dié van alle hoër organismes, bevat 'n stap wat bekend staan ​​as meiose, waar pare chromosome skei om nuwe kombinasies van genetiese eienskappe te gee.

Ascomycetes, soos bakkersgis, is gewild vir genetiese navorsing omdat die ascospores wat hulle in elke ascus produseer, die produkte van meiose is. As gis voedingstres het, byvoorbeeld deur die ontneming van óf 'n koolstofbron óf 'n stikstofbron, diploïed gis sal sporuleer. Die diploïede kern gaan deur meiose, wat vier produseer haploïed kerne wat dan opgeneem word in vier stresbestande askospore, ingekapsel in die ascus (sien figuur 1). Hierdie verpakking van die vier meiotiese produkte maak genetiese ontleding besonder eenvoudig.

Die gemak waarmee bakgis as haploïede selle of diploïede selle gehandhaaf kan word, is nog 'n kenmerk wat dit aantreklik maak vir genetici.

Waarvoor is gis goed?

Mense het gis, ongetwyfeld een van die vroegste gedomestiseerde organismes, gebruik vir beheerde fermentasie van voedsel en drank en vir suurdeeg in die bak deur die geskiedenis. Vandag word dit ook gebruik in 'n verskeidenheid kommersiële fermentasie- en biomassa -omskakelingsprosesse. Hul bruikbaarheid is gebaseer op hul vermoë om suikers en ander koolstofbronne om te skakel in etanol in die afwesigheid van lug (anaërobies), en in koolstofdioksied en water in die teenwoordigheid van lug (aërobies). Etanol is 'n waardevolle alternatief vir petroleum as brandstof en as grondstof vir die vervaardiging van baie belangrike kommersiële chemikalieë.

Gis is ook goeie kos. Dit is ryk aan proteïene en is 'n ongewoon goeie bron van die B-vitamiene. Dit bied 'n waardevolle bron van voedingstowwe wat belangrik is in lae-vleis of vegetariese diëte. Maar hoewel min uitstraalings uit die kombuis nogal so aanloklik is soos die gisagtige geur van broodbak, stem die meeste mense saam dat suiwer gis redelik sleg smaak.

Ander genera van gis het ook praktiese gebruike. Sommige kan koolwaterstowwe, soos petroleum, as 'n koolstofbron gebruik. Hierdie organismes kan petroleum letterlik in proteïene omskakel. Dit word gebruik om petroleum as 'n besoedelende stof uit die omgewing te verwyder en om laegraadse koolwaterstowwe om te sit in proteïene vir gebruik deur diere.

Is daar iets sleg aan gis?

Gis kan inderdaad kieme wees. Trouens, een uiters algemene patogeniese gis, Candida albicans, word deur die meeste mense in 'n goedaardige vorm gedra (Fincham & Day 1971). Terwyl dit by normaal gesonde mense onskadelik is, kan dit aansteeklik raak by diegene wie se immuunrespons verswak is en 'n ernstige patogeen word. Hierdie infeksies is veral moeilik om by mense te beheer omdat gismetabolisme so soortgelyk is aan ons s'n. Geneesmiddels wat giftig is vir die gis, is ook giftig vir mense. Nog 'n besonder nare patogene gis, Cryptococcus neoformans, produseer 'n lewensgevaarlike meningitis. Hierdie giste staan ​​bekend as "opportunistiese patogene" omdat hulle slegs 'n ernstige bedreiging is vir mense met verswakte immuunresponse soos diegene wat vigs het.

Hoe groei gis?

Beide haploïede en diploïede gisselle verdeel deur bot (sien figuur 2). Die seldelingssiklus begin met 'n enkele sel wat nie gebuffel is nie (Pringle & Hartwell 1981 Byers 1981). Hierdie sel bot, die knop groei tot byna die grootte van die moedersel, die kern verdeel en die twee selle skei in twee nie -gebuffelde selle. Die siklus begin dan weer vir albei die selle. Die resultaat is 'n eksponensiële toename in die aantal selle met 'n verdubbelingstyd gelyk aan die gemiddelde seldelingsiklustyd. Dit wissel na gelang van die stam, die groeimedium en die temperatuur, maar kan so kort as een uur wees. Teen hierdie tempo kan 'n enkele sel op een dag in 'n skaars sigbare kolonie groei.

Die groeigedrag van gis kulture is soortgelyk aan dié van bakterieë. As 'n groeimedium ingeënt word, benodig die selle 'n tydperk van voorbereiding voordat hulle begin deel. Na hierdie vertragingsperiode wat tot etlike ure kan wees, gaan hulle vinnig die eksponensiële fase in waartydens hul getal en massa met gelyke tydintervalle verdubbel. Na 'n groeiperiode teen 'n relatief konstante eksponensiële tempo, word die omgewingstoestand groei beperkend, sodat die toename verminder en die groei uiteindelik stop. Die bevolking en massa word konstant. Die kultuur bly stil en die selle bly vir 'n paar uur lewensvatbaar as die kultuur in die yskas gehou word, bly die selle maande lewensvatbaar. Uiteindelik sterf die selle, en by kamertemperatuur of warmer sal hulle ondergaan outolise: hul eie verteringsensieme word aktief en hulle verteer hulself letterlik, en verminder hul proteïene en nukleïensure tot hul eenvoudiger komponente hulle produseer 'n besonder onaangename stank in die proses.

Normale gis kan ook groei aërobies, in die teenwoordigheid van suurstof of anaërobies, in die afwesigheid van suurstof. Onder aërobiese groeitoestande kan hulle groei ondersteun deur eenvoudige koolstofbronne, soos etanol, asetaat of gliserol, te oksideer. As hulle voldoende suurstof het, sal hulle hul koolstofbronne, gewoonlik suikers, heeltemal oksideer tot koolstofdioksied en water. Onder anaërobiese toestande, sonder suurstof, kan gis suikers egter net na koolstofdioksied en etanol omskakel, wat minder van die energie herwin. In beide gevalle sal groei beperk word deur een of ander noodsaaklike voedingstof of die ophoping van die gifstof.

Gis groei ewe goed in vloeibare media of op 'n voedingsoppervlak soos 'n agarbord of 'n blootgestelde oppervlak van een of ander soort kos. In vloeistof moet hulle geroer of geskud word om anders aerobies te bly, hulle sak aan die onderkant van die houer, verbruik die opgeloste suurstof en groei anaërobies. Op 'n voedingsoppervlak in 'n geventileerde houer groei hulle aërobies met elke sel wat binne 2 of 3 dae 'n sigbare kolonie van tot 100 miljoen selle vorm.

Die gis lewensiklus: 'n volledige seksuele siklus

By seksuele organismes bestaan ​​die lewensiklus (sien figuur 3) uit 'n reeks gebeurtenisse wat wissel tussen a haploïed fase en a diploïed fase (Fincham & Day 1971). Die oorgang van die diploïede na die haploïede fase is die gevolg van 'n gespesialiseerde seldeling - meiose - waarin die kern twee keer verdeel na 'n enkele replikasie van die chromosome. Meiose lewer vier haploïede kerne. Tydens meiose verruil gepaarde homoloë chromosome in die diploïede kern dele en word dit versprei in die haploïede kerne wat nuwe kombinasies van genetiese eienskappe oplewer. By hoër organismes word 'n kiemsellyn onderskei van die liggaam (somatiese) selle. Die kiemsellyn produseer die voortplantingselle wat die gamete. Die gamete is die selle wat die genetiese inligting na die volgende generasie vervoer, terwyl die somatiese selle die res van die organisme vorm en geen direkte rol in oorerwing speel nie.

Die oorgang van die haploïede na die diploïede fase is die gevolg van paring (seksuele vervoeging) tussen gamete. Dit lei tot die vorming van a sigoot waarin twee ouerlike haploïede kerne saamsmelt om 'n diploïede kern te vorm. By hoër organismes is die gamete gedifferensieerde kiemslynselle. By hoër diere word verskillende gamete geproduseer deur individue van die teenoorgestelde geslag. By hoër plante word dit egter deur verskillende strukture vervaardig, hetsy op dieselfde plant of op verskillende plante.

By gis, soos in ander seksuele mikroörganismes, is die volledige seksuele siklus aanwesig, maar is baie eenvoudiger as in hoër plante en diere. Permanente differensiasie tussen kiemlyn en somatiese selle kom nie voor nie. In plaas daarvan vind verbygaande differensiasies plaas onder toepaslike omstandighede om die noodsaaklike gebeurtenisse te fasiliteer. Die eenvoud van die seksuele siklus in gis en die gemak waarmee al die gebeure gemanipuleer en waargeneem kan word, bied 'n unieke geleentheid om hierdie normaalweg obskure en abstrakte proses deur middel van eenvoudige, direkte, konkrete waarnemings te leer.

Paring in gis wat bemiddel word deur diffuseerbare molekules - feromone - kan maklik gedemonstreer word (Manney, Duntze & Betz 1981). Wanneer selle van teenoorgestelde paringstipe op die oppervlak van agargroeimedium in 'n petriplaat gemeng word, word veranderinge binne twee tot drie uur sigbaar. Aangesien elke tipe sel sy feromoon in die medium afskei, reageer dit op die een wat deur die teenoorgestelde tipe vervaardig word (MacKay & Manney 1974). Hulle reageer elkeen deur te onderskei in 'n gespesialiseerde funksionele vorm, a gamete. Die selle hou op om te deel en verander hul vorm (sien figuur 1). Hulle verleng en word peervormig. Hierdie kenmerkende selle is "shmoos" genoem vanweë hul ooreenkoms met die mitiese maar lieflike diere in die "Li'l Abner"-strokiesprent. Selle van teenoorgestelde paringstipes wat in aanraking of naby is, verbind aan die oppervlak en smelt saam en vorm 'n kenmerkende "grondboontjie" -vorm met 'n sentrale vernouing - twee shmoos versmelt aan hul klein ente. Die twee haploïede kerne in elke saamgevoegde paar smelt saam tot 'n diploïede kern en vorm 'n ware sigoot. Die diploïed bot onmiddellik by die vernouing en vorm 'n kenmerkende "klawerblaar" figuur. U kan al hierdie stadiums maklik onder die mikroskoop waarneem.

Die paringferomone wat deur haploïede selle afgeskei word, is klein peptiedmolekules wat deur agar versprei (Betz, Manney & Duntze 1981). Gevolglik is dit maklik om hul bestaan ​​en die uitwerking daarvan op selle van die teenoorgestelde paringstipes aan te toon. As selle van die paringstipe oornag op agarmedium gegroei word, versamel 'n hoë konsentrasie van die feromoon in die agar wat die groei omring. Dan as selle van die paringstipe a op hierdie agar geplaas word, begin hulle binne 'n paar uur die 'shmoo' -transformasie ondergaan. Die effek is nogal opvallend. 'N Mens kan dieselfde effek toon in 'n vloeibare medium waarin gekombineerde selle gegroei het. Trouens, toe gis die eerste keer bestudeer is, het gisbioloë hierdie eenvoudige metodes gebruik om die feromone te isoleer en te karakteriseer.

Shmoos is dan die gamete in gis. Hulle onderskei slegs van normale vegetatiewe haploïede selle slegs wanneer 'n sel van die teenoorgestelde paringstipe teenwoordig is. Op dieselfde manier kan enige diploïede sel deur meiose gaan en haploïede vorm wat die potensiaal het om gamete te word (Esposito & Klapholz 1981 Fowell 1969b). Meiose is deel van die sporulasieproses wat begin word wanneer diploïede selle na 'n voedingsgebalanseerde medium oorgedra word. Maar die veranderinge word eers na drie tot vyf dae onder die mikroskoop duidelik wanneer die asci redelik kenmerkend word. Teoreties behoort alle asci vier spore te bevat, maar in die praktyk bevat baie net twee of drie. Die ascus het 'n klonterige vorm, baie soos lemoene in 'n doeksak. Deur die sporuleringsmengsel te behandel met 'n geredelik beskikbare ru-preparaat van verteringsensieme van tuinslakke sal die wand van die askus verwyder word, wat die spore bevry. Wanneer die spore, binne die ascus of na bevryding, na 'n voedingstowwe teruggekeer word, ontkiem hulle en ondergaan vegetatiewe groei in 'n stabiele haploïede fase. Haploïede stamme kom voor in twee paringstipes, genoem a en (alfa). Binne elke ascus is twee spore gewoonlik paringstipe a en die ander twee is. As 'n sel van een paringstipe een van die ander paringstipes teëkom, begin hulle 'n reeks gebeurtenisse wat tot vervoeging lei. Die resultaat is 'n diploïede sel, wat groei deur mitotiese seldeling in 'n stabiele diploïede fase. As 'n mens slegs 'n sporulêre selkultuur na groeimedium oordra, is die gevolg 'n gemengde populasie van haploïede stamme en nuwe diploïede stamme wat analoog is aan die nageslag van 'n kruising tussen diploïede hoër organismes.

Gewoonlik isoleer gisgenetici die spore, willekeurig of deur mikromanipulasie, om te voorkom dat die haploïede stamme paring en die volgende generasie vorm. Hierdie mate van beheer en die vermoë om die genetiese eienskappe in die haploïede fase waar te neem, maak die genetiese analise van gis kragtig en doeltreffend. Die ontleding van ewekansige populasies van spore, terwyl dit tydrowend is, is eenvoudig genoeg vir hoërskoolleerlinge, en is veral geskik vir individuele projekte vir gevorderde studente.


DIYeast: Skep borde

U het dus wilde gis en goggas in u agterplaas, vrugte- of vatkamer gekry. Miskien het u daarmee gebrou en het u u eie unieke huiskultuur. Dit is wonderlik. Jy is 'n rockster.

Maar wat het jy regtig? Is dit wilde gis? Is dit iets funky, soos Brett? Is dit alles hierbo? Wat’s veroorsaak dat suur fermentasie, indien enigsins? Gemengde wilde kulture is wonderlik, en is so na as wat ons ooit sal kry om antieke fermentasiepraktyke te repliseer.

Dit’s nie totdat jy individuele suiwer stamme isoleer wat jy’ll in staat wees om 'n soort van beheer oor jou mikrobes te kry en in staat wees om akkuraat te reproduseer soortgelyke groepe. Jy’ll ook leer wat maak elke ras bosluis, en watter bier style en bestanddele hulle smelt met die beste. Plus, sodra jy jou eie gisras isoleer, sal almal dink jy’re 'n whiz kid.

Voordat u verder gaan, betaal Bootleg Biology ’s Gereedskapstel vir agterplaasgiste. Alles wat die eksperimentele tuisbrouwer nodig het om wilde goggas vas te vang, agarplate te maak en wilde gis te isoleer.

Star San (sit 'n bietjie in 'n goedkoop plastiek spuitbottel om jou werkoppervlak skoon te maak)

Plastiek steriele petriskosse met deksels (glasskottels is herbruikbaar, maar duurder)

Parafilm (rekbare plastiekwrap is 'n goeie plaasvervanger)

Bunsen of draagbare brander (die gebruik van 'n gasstoof in u kombuis is goedkoper en amper so effektief)

  • Donker/warm gebied om plate te broei (hoe warmer dit is, hoe vinniger sal u weet of u bord besmet is)

Antimikrobiese UV-lig (nie nodig nie) 2

Byna al hierdie items is reeds in u kombuis of in u gereedskapstel vir tuisgemaakte produkte, met die uitsondering van petriskottels. Plastiekpetriskottels is goedkoop en maklik op Amazon gevind. Hulle kom gewoonlik in 60 mm of 100 mm deursnee. As jy probeer om mikrobes te isoleer van 'n gemengde kultuur soos 'n Wild Yeast Starter, dit’s waarskynlik die beste om te gaan met die groter grootte gereg om die waarskynlikheid van die isolering van 'n stam te verhoog.

Agar is 'n gelatienagtige stof gemaak van seewier wat, wanneer dit met wort gekook word, die mengsel vinnig in 'n vaste, jellie-agtige medium laat vorm, wat individuele mikrobe kolonies kan groei en kan voed.

Skep 'n eenvoudige agarbord: 3

  • 300 ml 1,040 (of laer) wort (As uittreksel gebruik word, kook water en DME -mengsel voordat ander resepbestanddele bygevoeg word)
  • 5 gram agar agar poeier (Voeg meer by as vloeistof nie stol nie)
  • Skep gisvoedingstof (ander bronne van aminosuur kan bygevoeg word vanweë hul voordeel vir gismetabolisme, maar dit is nie nodig nie)
  • U kan natuurlik ook die resep oorslaan en Bootleg Biology se Wild Yeast Agar Blend gryp
  1. Verhit wort in 'n klein pot tot kookpunt en roer agar by.
  2. Bring tot kookpunt. Agar en wort sal nie suksesvol bind as dit nie tot kookpunt gebring word nie.
  3. Laat afkoel vir 'n paar minute totdat die temperatuur in die lae-100’s Fahrenheit of ongeveer 5-10 minute is. Hou u pot deeglik dop, aangesien agar baie vinnig kan stol, maar die medium moet nog steeds 'n dik vloeistof wees as dit in die petriskottel gegooi word.
  4. Gooi 'n klein lagie vloeistof op die petriskottel en beweeg na jou trekvrye stoorarea. Dit is belangrik om die vloeistof af te koel voordat dit met 'n petrisdeksel bedek word om te voorkom dat kondens op die deksel vorm, wat die waarskynlikheid van vormgroei verminder.
  5. As 'n goeie agar/wort verhouding gebruik is, behoort die agarplate binne 'n paar minute te stol. As u vind dat u borde nie#8217t is nie, moet u u mengsel moontlik weer kook met meer agar.
  6. Draai die rande van die plaatdeksel toe met rekbare plastiekfolie of uitgerekte stroke Parafilm van 1/2 duim. Dit sal help om die kontaminante van die agarplaat te verminder en te voorkom dat die bord uitdroog as u die bord nie kort daarna gebruik nie.
  7. Laat jou borde onderstebo (voorkom dat kondensasie op jou agarmedium val) vir 'n paar dae op 'n warm, donker plek om te broei. Dit sal help om vas te stel watter plate besmet is met vormspore of ander ongenooide gaste, wat dit onbruikbaar maak 2. As jy klaar is, bêre jy dit onderstebo in 'n hersluitbare plastieksak en verkoel.

Onthou, jy’re nie werk in 'n skoon kamer met 'n kap, sal jy besmet plate kry. Moet dus nie hartseer wees as sommige van die borde wat jy geskep het, so lyk na inkubasie nie:

Nou dat jy’ve het jou eie agar bord, die laaste ding om te doen is om Isoleer u gis.


Media maak

I. Om kultuurmedia te maak, verg geduld en aandag aan detail. Kyk na video 1: Maak mikrobiologiese media

Kyk na video 1: Maak mikrobiologiese media deur Bio-Rad. URL: https: //youtu.be/BH4ESgWU_Eo

II. Giet Agar borde. Kyk na video 2: Voorbereiding van vaste media, video is verfilm by NC State Microbiology laboratoriums.

Kyk na video 1: Voorbereiding van vaste media, video is verfilm by NC State Microbiology -laboratoriums. URL: https://youtu.be/P7M_MCXbZjc


LB Agar Lennox (MB38901)

Beskrywing: Aanbevole medium vir die toets van Escherichia coli in molekulêre genetiese studies. LB Agar Lennox is 'n voedingsryke medium wat deur Lennox ontwikkel is vir die groei en instandhouding van 'n suiwer kultuur van rekombinante stamme van E coli. Tryptone verskaf stikstof, vitamiene, minerale en aminosure wat noodsaaklik is vir groei. Gisekstrak is 'n bron van vitamiene, veral die B-groep. Natriumchloried verskaf noodsaaklike elektroliete vir vervoer en osmotiese balans. Bakteriologiese agar is die stolmiddel. As jy wil, kan antibiotika ook bygevoeg word.

GEBRUIKSAANWYSINGS: Skors 35 gram medium in 1 L gedistilleerde water. Meng goed en los op deur te verhit en te roer. Kook vir een minuut tot volledige oplos. Steriliseer in autoklaaf by 121ºC vir 15 minute. Laat afkoel tot 45-50ºC, meng goed en gooi in borde.

Samestelling:
– Tryptoon: 10 g/L
– Natriumchloried: 5 g/L
– Gisekstrak: 5 g/L
– Bakteriologiese agar: 15 g/L
(Finale pH 7,0 ± 0,2 by 25 ºC)

Oplosbaar in: water

Berging: Bêre by 2-25 ºC. Hou die poeiermedium een ​​keer oop om hidrasie te voorkom. Beskerm die vorm lig en klam


Agar bord

An agar bord is 'n petriskottel wat 'n groeimedium bevat wat met agar gestol is, wat gebruik word om mikroörganismes te kweek. Soms word selektiewe verbindings bygevoeg om groei te beïnvloed, soos antibiotika. [1]

Agar plaat
GebruikeMikrobiologiese kultuur
Art
Verwante itemspetribakkie
Groeimedium

Individuele mikroörganismes wat op die plaat geplaas word, sal tot individuele kolonies groei, elkeen 'n kloon wat geneties identies is aan die individuele voorouer-organisme (behalwe vir die lae, onvermydelike mutasietempo). Die plaat kan dus óf gebruik word om die konsentrasie van organismes in 'n vloeibare kultuur te skat óf 'n geskikte verdunning van daardie kultuur met behulp van 'n kolonieteller, of om geneties suiwer kulture te genereer uit 'n gemengde kultuur van geneties verskillende organismes.

Daar is verskillende metodes beskikbaar om selle uit te deel. Een tegniek staan ​​bekend as "streaking". In hierdie tegniek word 'n druppel van die kultuur aan die einde van 'n dun, steriele draadlus, soms bekend as 'n inokulator, oor die oppervlak van die agar gestreep, wat organismes agterlaat, 'n hoër getal aan die begin van die streep en 'n laer getal aan die einde. Op 'n sekere punt tydens 'n suksesvolle "streep", sal die aantal organismes wat neergelê word sodanig wees dat afsonderlike individuele kolonies in daardie area sal groei wat verwyder kan word vir verdere verbouing, met behulp van 'n ander steriele lus. Dit is noodsaaklik om steriel te werk om besmetting op die plate te voorkom. [1]

'N Ander manier om organismes langs strepies op agarplate te plaas, is die kolanalise. Hierdie tipe analise word gereeld gebruik om die lewensvatbaarheid van selle te kontroleer en word uitgevoer met pinners (dikwels ook froggers genoem). 'N Derde tegniek wat gebruik word, is die gebruik van steriele glaskrale om selle uit te plaat. In hierdie tegniek word selle gegroei in 'n vloeibare kultuur waarvan 'n klein volume op die agarplaat gepipetteer word en dan met die krale versprei word. Replika -plating is 'n ander tegniek om selle op agarplate uit te plaas. Hierdie vier tegnieke is die algemeenste, maar ander is ook moontlik. Dit is van kardinale belang om op 'n steriele manier te werk om kontaminasie op die agarplate te voorkom. Plating word dus dikwels in 'n laminaire vloerkas of op die werkbank langs 'n bunsenbrander gedoen. [2]


Steek Agar

Maak agarsteke vir die berging en vervoer van bakteriese stamme.

1L Komponent
10 g Tryptoon
5 g Gis uittreksel
10 g Natriumchloried
6 g Agar

Outoklaaf. Oordra na kersfilms voordat die media afkoel. Kan die flessies vir 'n paar maande by 4 C stoor.


Kyk die video: KHASA AALA CHAHAR: LOOT LIYA Official Video. Sweta Chauhan. New Haryanvi Songs Haryanavi 2021 (Oktober 2022).