Inligting

16.5: Mikroverslag 4- Aanvullingsanalise - Biologie

16.5: Mikroverslag 4- Aanvullingsanalise - Biologie


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Figuur: Die figuur in die hart van hierdie mikroverslag is 'n multi-paneel figuur wat replika plate van stamme wys wat getransformeer is met ooruitdrukking plasmiede. Verwys na die riglyne vir Mikroverslag 1 om te sien hoe om figure met veelvuldige panele op te stel.

Materiale en metodes: Verskaf inligting oor die transformasie- en replika-plateringsprosedures, sowel as die media wat in die eksperimente gebruik word. Indien moontlik, verwys na die laboratoriumhandleiding en let op enige veranderinge wat jy aan prosedures gemaak het.

Stamme en plasmiede: Sien mikroverslae 1 en 3.

Media: Sien mikroverslag 1.

Transformasie: Iemand wat jou resultate probeer weergee, sal besonderhede oor die transformasieprosedure moet weet, want transformasiedoeltreffendheid verskil baie en toon 'n sterk afhanklikheid van reagense en inkubasietoestande. U kan na die laboratoriumhandleiding verwys.

Replika platering: Dit is 'n standaardprosedure. U kan ook na die laboratoriumhandleiding verwys.

Resultate en bespreking: Jou figuur met die geskandeerde plate is die fokuspunt van hierdie afdeling. Sluit 'n enkele datatabel in wat met die berekende transformasiedoeltreffendheid met elke plasmied en die vermoë van getransformeerde stamme (J/N of +/-) om op die verskillende replika plate te groei.Transformasie doeltreffendheid moet uitgedruk word in aantal getransformeerde selle/μg plasmied DNA.

Die R&D-afdeling moet 'n storie vertel van hoe die replikaplate jou toegelaat het om te besluit of jou
Met-proteïen word tussen die twee gisspesies bewaar. Jy het dalk komplementering waargeneem of nie. Versuim om komplementering waar te neem is nie noodwendig as gevolg van eksperimentele foute nie. (Watter plate dien as 'n kontrole teen eksperimentele foute?) Komplementering is 'n funksionele toets wat afhang van beide die uitdrukking van die samesmeltingsproteïen en die vermoë van die samesmeltingsproteïen om 'n reaksie in Met-biosintese te kataliseer. Die samesmeltingsproteïene het groot C-terminale uitbreidings wat hul normale ensiematiese funksies kan beïnvloed. Negatiewe resultate kan net so belangrik wees as positiewe resultate in die bevordering van wetenskaplike begrip.

As jy nie komplementering waargeneem het nie, bespreek moontlike redes waarom dit moontlik gebeur het en stel toekomstige eksperimente voor wat kan help om hierdie vrae te beantwoord. Jy sal dalk nuwe plasmiedkonstrukte wil voorstel vir bykomende eksperimente. Jy sal dalk ook inligting van jou BLASTP-ontledings wil inbring. (Wat is die E-waarde?) Maak seker dat jy genoeg regverdiging insluit dat jou voorgestelde eksperimente nuttige data sal verskaf.


Gary Ruvkun

Massachusetts Algemene Hospitaal Departement van Molekulêre Biologie tuisblad:

Groot navorsingsbelangstellings

mikroRNA- en RNA-interferensiemeganismes, bakteriese en dieregenetiese ontleding van mikrobioominteraksies, neuro-endokriene beheer van ontgifting, immuniteit en veroudering, lewe op ander planete.

Akademiese trajek

1985 - huidige Ass., Assoc., Professor in Genetika, Harvard Mediese Skool
1982 - 1985 Junior Fellow, Society of Fellows, Harvard Universiteit
1982 Ph.D. Harvard Universiteit (Biofisika)
1973 A.B. Universiteit van Kalifornië in Berkeley (Biofisika)

2004 Rosenstiel-toekenning, Brandeis Universiteit (met Victor Ambros, Andy Fire, Craig Mello)
2008 Nasionale Akademie vir Wetenskappe
2008 Benjamin Franklin-medalje, Franklin Institute (met Victor Ambros en David Baulcombe)
2008 Albert Lasker-toekenning vir Basiese Mediese Navorsing (met Victor Ambros en David Baulcombe)
2008 Kanada Gairdner Internasionale Toekenning (met Victor Ambros)
2008 Warren Driejaarlikse prys, Massachusetts Algemene Hospitaal (met Victor Ambros)
2009 Louisa Gross Horwitz-prys, Columbia Universiteit (met Victor Ambros)
2009 Amerikaanse Akademie vir Kuns en Wetenskappe
2009 Shaul en Meira Massry-prys (met Victor Ambros)
2010 Académie Royale des Sciences, des Lettres et des Beaux-Arts de Belgique
2009 Nasionale Akademie vir Geneeskunde
2011 Dan David-prys (met Cynthia Kenyon)
2012 Paul Janssen-toekenning vir biomediese navorsing (met Victor Ambros)
2013 Ipsen Foundation Longevity-prys
2013 Irving Wright-toekenning, Amerikaanse Stigting vir Verouderingsnavorsing
2014 Wolf-prys in medisyne (met Victor Ambros)
2014 Gruber Genetika-prys (met Victor Ambros en David Baulcombe)
2015 Deurbraakprys in Lewenswetenskappe (met Victor Ambros)
2016 March of Dimes-prys in ontwikkelingsbiologie (met Victor Ambros)
2019 Amerikaanse Filosofiese Vereniging

Professionele aktiwiteite

2004 - huidige Harvard Origins of Life Initiative
2006 - huidige Broad Institute Associate
2015 - huidige voorsitter, Wetenskaplike Hersieningskomitee, Smith Family Awards Program in Biomediese Navorsing
2015 - huidige Paul Glenn Mediese Stigting Wetenskaplike Adviesraad
2018 - huidige California Life Sciences Company (Calico) Wetenskaplike Adviesraad

Verlede
2003 - 2011 Harvard Mikrobiese Wetenskappe Inisiatief Reëlingskomitee
2004 - 2007 NIH Nasionale Adviesraad oor Veroudering
2012 - 2014 Ellison Mediese Stigting Wetenskaplike Adviesraad
2015 Vallee Foundation Besoekende Professorskap
2012 - 2017 NAS Ruimtestudieraad, Komitee oor Astrobiologie en Planetêre Wetenskap
2017 - 2018 NAS Ruimtestudieraad, Oorsig van Planetêre Beskermingsbeleid Ontwikkelingsprosesse
2015 – 2019 Voorsitter, Genetika-afdeling van die Nasionale Akademie van Wetenskappe
2018 - 2019 NASA Mars-monsterterugsterilisasiewerkgroep, Jet Propulsion Laboratory, Caltech

Ere-genooide lesings

1998 Nippon Telefoon en Telegraaf Wetenskap Forum Openbare Lesing, Tokio
2003 Harvey-lektor, Rockefeller Universiteit
2008 Jean Mitchell Watson-lesing, Universiteit van Chicago
2012 Mendel 190ste Verjaarsdag Simposium, Brno, Tsjeggiese Republiek
2013 60ste herdenking van die Double Helix, Cold Spring Harbor

Bibliografie

1. Ruvkun G, Ausubel FM 1980 Interspesie homologie van nitrogenase gene. Proc. Natl. Acad. Wetenskap. VSA 77: 191-195. PMCID: PMC348234

2. Ruvkun G, Ausubel FM 1981. 'n Algemene metode vir plekgerigte mutagenese in prokariote. Nature 289: 85-88. PMID: 6256652

3. Ruvkun G, Long, SR, Meade, HM, Ausubel, FM 1981. Molekulêre genetika van simbiotiese stikstofbinding. Cold Spring Harbor Simposium on Quantitative Biology 45: 492-500.

4. Meade HM, Long SR, Ruvkun G, Brown SE, Ausubel FM 1982. Fisiese en genetiese karakterisering van simbiotiese en auxotrofiese mutante van Rhizobium meliloti geïnduseer deur transposon Tn5 mutagenese. J Bacteriol 149: 114-122. PMCID: PMC216598

5. Ruvkun G, Sundaresan V, Ausubel FM 1982. Spesifieke beskerming van nukleotiede in die lac operateur van dimetielsulfaat (DMS) metilering van DNase I nicking deur ru bakteriese ekstrakte. Gene 18: 245-255. PMID: 6290328

6. Ruvkun G, Sundaresan V, Ausubel FM 1982. Gerigte transposon Tn5 mutagenese en komplementeringsanalise van die Rhizobium meliloti simbiotiese stikstofbinding (nif) gene. Sel 29: 551-559. PMID: 6288262

7. Ruvkun G, Long SR, Meade HM, van den Bos RC, Ausubel FM 1982. ISRml: a Rhizobium meliloti invoegingsvolgorde wat by voorkeur in stikstoffiksasie (nif) gene omskakel. J Mol Appl Genet 1: 405-418. PMID: 6296251

8. Finney M, Ruvkun, G, en Horvitz, HR 1988. Die Caenorhabditis elegans sellyn en differensiasiegeen unc-86 kodeer 'n proteïen wat 'n homeodomein en uitgebreide ooreenkoms met soogdiertranskripsiefaktore bevat. Sel 55: 757-769. PMID: 2903797

9. Herr W, Sturm, RA, Clerc, RG, Corcoran, LM, Baltimore, D, Sharp, PA, Ingraham, HA, Rosenfeld, MG, Finney, M, Ruvkun, G, en Horvitz, HR 1988 Die POU-domein: 'n groot bewaarde gebied in die soogdierkuil-1, okt-1, okt-2, en Caenorhabditis elegans unc-86 geen produkte. Gene en Ontwikkeling 2: 1513-1516. PMID: 3215510

10. Ruvkun G, Ambros, V, Coulson, A, Waterston, R, Sulston, J, en Horvitz, HR 1989. Molekulêre genetika van die Caenorhabditis elegans heterochroniese geen lin-14. Genetika 121: 501-516. PMCID: PMC1203636

11. Ruvkun G en Giusto, J 1989 Die Caenorhabditis elegans heterochroniese geen lin-14 kodeer 'n kernproteïen wat 'n tydelike skakelaar tydens ontwikkeling vorm. Nature 338: 313-319. PMID: 2922060

12. Bürglin TR, Finney, M, Coulson, A, en Ruvkun, G 1989. C. elegans het talle homeoboks-bevattende gene. Nature 341: 239-243. PMID: 2571091

13. Ruvkun G, Gilbert, W, Horvitz, HR 1990. Opsporing van mutasies en DNA-polimorfismes met behulp van heelgenoom Suiderkruis-hibridisasie. Nukleïensure Navorsing 18: 809-815. PMCID: PMC330331

14. Finney M en Ruvkun, G 1990. Die unc-86 geenproduk koppel sellyn en selidentiteit in Caenorhabditis elegans. Sel 63: 895-905. PMID: 2257628

15. Wightman B, Bürglin, TR, Gatto, J, Arasu, P, G Ruvkun 1991. Negatiewe regulatoriese volgordes in die lin-14 3' onvertaalde streek is nodig om 'n tydelike skakelaar te genereer tydens C. elegans ontwikkeling. Gene en Ontwikkeling 5: 1813-1824. PMID: 1916264

16. Arasu P, Wightman, B, G Ruvkun 1991. Tydelike regulering van lin-14 deur die antagonistiese werking van twee ander heterochroniese gene, lin-4 en lin-28. Gene en Ontwikkeling 5: 1825-1833. PMID: 1916265

17. Ruvkun G, Wightman, B, Bürglin, TR, en P Arasu. 1991. Dominante wins van funksie mutasies wat lei tot wanregulering van die C. elegans heterochroniese geen lin-14, en die evolusionêre implikasies van dominante mutasies in patroonvormingsgene. Ontwikkeling (Bylaag): 47-54. PMID: 1742500

18. Bürglin TR, Ruvkun, G, Coulson, A, Hawkins, N, McGhee, J, Schaller, D, Wittmann, C, Müller, F, en Waterston, R 1991. Nematode homeobox cluster. Nature 351: 703. PMID: 1676487

19. Miller D, Shen, M, Shamu, C, Bürglin, T, Ruvkun, G, Ghee, M Dubois, L Wilson 1992 Die C. elegans unc-4 geen kodeer 'n homeodomein-proteïen wat die patroon van sinaptiese insette na spesifieke motoriese neurone bepaal. Nature 355: 841-845. PMID: 1347150

20. Xue DM, Finney, M, Ruvkun, G en M Chalfie 1992. Regulering van die mec-3 geen deur die C. elegans homeoproteïene Unc-86 en Mec-3. EMBO J. 11: 4969-4979. PMCID: PMC556975

21. Bürglin TR en G Ruvkun 1992. Nuwe motief in PBX-gene. Nature Genet 1: 319-320. PMID: 1363814

22. Wightman B, I Ha en G Ruvkun 1993. Post-transkripsionele regulering van die heterochroniese geen lin-14 deur lin-4 bemiddel tydelike patroonvorming in C. elegans. Sel 75: 855-862. PMID: 8252622

23. Gottlieb S en G Ruvkun 1994. daf-2, daf-16, daf-23: geneties interaksie gene wat die vorming van dauer beheer in C. elegans. Genetika 137: 107-120. PMCID: PMC1205929

24. Greenstein D, Hird, S Plasterk, R, Andachi, Y, Kohara, Y, Wang, B, Finney, M en G Ruvkun 1994. Geteikende mutasies in die C. elegans POU-homeobox geen ceh-18 veroorsaak defekte in oösietselsiklus arrestasie, gonademigrasie en epidermale differensiasie. Gene en Ontwikkeling 8: 1935-1948. PMID: 7958868

25. Baumeister R, Liu, Y en G Ruvkun 1996. Afkomsspesifieke reguleerders koppel sellyn-asimmetrie aan die transkripsie van die Caenorhabditis elegans POU geen unc-86 tydens neurogenese. Gene en Ontwikkeling 10: 1395-1410. PMID: 8647436

26. Morris JZ, Tissenbaum, HA en G Ruvkun 1996. 'n Fosfatidylinositol-3-OH kinase familielid wat langlewendheid en diapouse reguleer in Caenorhabditis elegans. Nature 382: 536-538. PMID: 8700226

27. Barnes TM, Jin, Y, Horvitz, HR, Ruvkun, G, en S Hekimi 1996. Die C. elegans gedragsgeen unc-24 kodeer 'n nuwe tweeledige proteïen soortgelyk aan beide eritrosietband 7.2 (stomatien) en nie-spesifieke lipiedoordragproteïen. J. van Neurochemistry 67: 46-57. PMID: 8667025

28. Ha I, Wightman, B en G Ruvkun 1996. A bult lin-4/lin-14 RNA dupleks is voldoende vir Caenorhabditis elegans lin-14 temporale gradiëntvorming. Gene en Ontwikkeling 10: 3041-3050. PMID: 8957004

29. Sze JY, Liu, Y en G Ruvkun 1997. VP16-aktivering van die C. elegans neurale spesifikasie transkripsie faktor UNC-86 onderdruk mutasies in stroomaf gene en veroorsaak defekte in neurale migrasie en akson uitgroei. Ontwikkeling 124: 1159-1168. PMID: 9102303

30. Sluder AE, Lindblom, T en G. Ruvkun 1997. Die Caenorhabditis elegans wees-kernhormoonreseptorgeen nhr-2 funksioneer in vroeë embrioniese ontwikkeling. Ontwikkelingsbiologie 184: 303-319. PMID: 9133437

31. Hobert O, Mori, I, Yamashita, Y, Honda, H, Ohshima, Y, Liu, Y en G Ruvkun 1997. Regulering van interneuronfunksie in die C. elegans termoregulerende pad deur die ttx-3 LIM homeobox geen. Neuron 19: 345-357. PMID: 9292724

32. Patterson GI, Koweek, A, Wong, A, Liu, Y en G Ruvkun 1997. Die DAF-3 Smad-proteïen antagoniseer TGF-beta-verwante reseptorsein in die C. elegans duur pad. Gene en Ontwikkeling 11: 2679-2690. PMCID: PMC316611

33. Kimura KD, Tissenbaum, HA, Liu, Y en G Ruvkun 1997. daf-2, 'n insulienreseptoragtige geen wat langlewendheid en diapouse reguleer C. elegans. Science 277: 942-946. PMID: 9252323

34. Ogg S, Paradis, S, Gottlieb, S, Patterson, GI, Lee, L, Tissenbaum, HA en G Ruvkun 1997. Die Vurkkop-transkripsiefaktor DAF-16 transduseer insulienagtige metaboliese en langlewendheidseine in C. elegans. Nature 389: 994-999. PMID: 9353126

35. Tissenbaum HA en G Ruvkun 1998. 'n Insulienagtige seinweg beïnvloed beide langlewendheid en voortplanting in C. elegans. Genetika 148: 703-717. PMCID: PMC1459840

36. Hobert O, Liu, Y, D'Alberti, T, en G Ruvkun 1998. Beheer van neurale ontwikkeling en funksie in 'n termoregulerende netwerk deur die LIM homeobox geen lin-11. J. Neuroscience 18: 2084-2096. PMID: 9482795

37. Paradis S en G Ruvkun 1998. Caenorhabditis elegans Akt/PKB transduseer insulienreseptoragtige seine van AGE-1 PI3-kinase na die DAF-16-transkripsiefaktor. Gene en Ontwikkeling 12: 2488-98. PMCID: PMC317081

38. Ruvkun G en O Hobert 1998. Die taksonomie van ontwikkelingsbeheer in Caenorhabditis elegans. Wetenskap 282: 2033-41. PMID: 9851920

39. Ogg S en G Ruvkun 1998. Die C. elegans PTEN homoloog DAF-18 tree op in die insulienreseptoragtige metaboliese seinweg. Mol Sel 2: 887-93. PMID: 9885576

40. Hobert O en G Ruvkun 1998. 'n Algemene tema vir LIM homeobox geenfunksie oor filogenie? Biol. Bul. 195: 377-80. PMID: 9924780

41. Slack F en G Ruvkun 1998. 'n Nuwe herhalingsdomein wat dikwels met RINGvinger- en B-boksmotiewe geassosieer word. Tendense Biochem Sci 23:474-5. PMID: 9868369

42. Hobert O, Moerman DG, Clark KA, Beckerle MC, en G Ruvkun 1999. 'n Bewaarde LIM-proteïen wat spieraanhangers affekteer aansluitingsintegriteit en meganosensoriese funksie in Caenorhabditis elegans. J Cell Biol 144: 45-57. PMCID: PMC2148118

43. Hobert O, Tessmar K en G Ruvkun 1999. Die C. elegans lim-6 LIM homeobox geen reguleer neuriet uitgroei en funksie van spesifieke GABAergiese neurone. Ontwikkeling 126, 1547-1562. PMID: 10068647

44. Paradis S, Ailion, M, Toker A, Thomas, JH en G Ruvkun 1999. 'n PDK1 homoloog is nodig en voldoende om AGE-1 PI3 kinase seine oor te dra wat diapouse reguleer in C. elegans. Gene en Ontwikkeling 13: 1438-1452. PMCID: PMC316759

45. Sagasti A, Hobert O, Troemel ER, Ruvkun G, Bargmann CI 1999. Alternatiewe olfaktoriese neuron lotgevalle word gespesifiseer deur die LIM homeobox geen lim-4. Gene Dev 13: 1794-80. PMCID: PMC316880

46. ​​Tissenbaum HA Hawdon, J, Perregaux, M, Hotez, P, Guarente, L, en G Ruvkun 2000. 'n Algemene muskariniese pad vir diapouse herstel in die ver-verwante aalwurmspesies Caenorhabditis elegans en Ancylostoma caninum. Proc. Natl. Acad. Wetenskap. 97: 460-465. PMCID: PMC26685

47. Sze JY, Victor, M, Loer, C, Shi, Y en G Ruvkun 2000. Voedsel- en metaboliese seindefekte in 'n C. elegans serotoniensintese mutant, Nature 403: 560-4. PMID: 10676966

48. Reinhart BJ, Slack, FA., Basson, M, Pasquinelli, AE, Bettinger, JC, Rougvie, AC, Horvitz, HR, en G Ruvkun 2000. The 21 nucleotide laat-7 RNA reguleer ontwikkelingstydsberekening in C. elegans. Nature, 403: 901 - 906. PMID: 10706289

49. Slack FJ, Basson, M, Liu, Z, Ambros, V, Horvitz, HR, en G Ruvkun 2000. Die lin-41 RBCC geen tree in die C. elegans heterochroniese pad tussen die laat-7 regulatoriese RNA en die lin-29 transkripsie faktor. Mol. Sel 5: 659-69. PMID: 10882102

50. Kagoshima H, Sommer, R, Reinhart, B, Ruvkun, G, Cassata, G, en TR Bürglin 2000. Gegradeerde uitdrukking van ceh-14 verslaggewers in die hipodermis word geïnduseer deur 'n gonadale sein. Ontwikkelingsgene en evolusie 210:564-569. PMID: 11180807

51. Nasrin N, Ogg, S, Cahill, C, Biggs, W, Nui, S, Dore, J, Calvo, D, Shi, Y, Ruvkun, G en M Alexander-Bridges 2000. DAF-16 werf die CREB -bindende proteïen koaktivator kompleks aan die insulienagtige groeifaktor bindende proteïen 1 promotor in HepG2 selle. Proc. Natl. Acad. Sci., 97: 10412-7. PMCID: PMC27038

52. Pasquinelli A, Reinhart, B, Slack F, Maller, B, Kuroda, M, Martindale, M, Srinivasan, A, Fishman, M, Hayward D, Ball E, Degnan, B, Müller, P , Spring, J, Finnerty, J, Corbo, J, Levine, M, Leahy, P, Davidson, E en G Ruvkun 2000. Bewaring van die volgorde en tydelike uitdrukking van laat-7 heterochroniese regulerende RNA. Nature 408: 86-89. PMID: 11081512

53. Wolkow CA, Kimura, KD, Lee, M en G Ruvkun 2000. Regulering van C. elegans lewensduur deur insulienagtige sein in die senuweestelsel. Wetenskap 290:147-50. PMID: 11021802

54. Cahill CM, Tzivion, G, Nasrin, N, Ogg, S, Dore, J, Ruvkun, G, en M Alexander-Bridges 2001. Fosfatidylinositol 3-kinase sein inhibeer DAF-16 DNA binding en funksie via 14-3- 3-afhanklike en 14-3-3-onafhanklike paaie. J. Biol. Chem. 276: 13402-10. PMID: 11124266

55. Reinhart BJ en G Ruvkun 2001. Isovorm-spesifieke mutasies in die Caenorhabitis elegans heterochroniese geen lin-14 stadium-spesifieke patroonvorming beïnvloed. Genetika 157: 199-209. PMCID: PMC1461488

56. Bürglin TR en G Ruvkun 2001. Regulering van ektodermale en ekskretoriese selfunksie deur die C. elegans POU homeobox geen ceh-6 Ontwikkeling 128: 779-790. PMID: 11171402

57.Pierce SB, Costa, M, Wisotzkey, R, Devadhar, S, Homburger, SA, Buchman, AR, Ferguson, KC, Heller, J, Platt, DM, Liu, LX, Pasquinelli, AE, Doberstein, SK, G Ruvkun 2001 Regulering van DAF-2 reseptor sein deur menslike insulien en ins-1, 'n lid van die buitengewoon groot en diverse C. elegans insulien geen familie. Gene en Ontwikkeling 15: 672-686. PMCID: PMC312654

58. Grishok A, Pasquinelli, AE, Conte, D, Li, N, Parrish, S, Ha, I, Baillie, DL, Fire, A, Ruvkun, G, en Mello, CC 2001. Gene en meganismes wat verband hou met RNA-inmenging reguleer uitdrukking van die klein temporale RNA's wat beheer Caenorhabditis elegans ontwikkelingstydsberekening. Sel 106: 23-34. PMID: 11461699

59. Lee RYN, Hench, J, en G Ruvkun 2001. Regulering van C. elegans DAF-16 en sy menslike ortoloog FKHRL1 deur die daf-2 insulienagtige seinweg. Curr Biol. 11: 1950-1957. PMID: 11747821

60. Sze JY, Zhang, S, Li, J en G Ruvkun 2002. Die C. elegans POU-domein transkripsie faktor UNC-86 reguleer die tph-1 triptofaanhidroksilase geen en neuriet uitgroei in spesifieke serotonergiese neurone. Ontwikkeling, 129:3901-11. PMID: 12135927

61. Ruvkun G, M Finney, G Kerk, M Zuber, W Gilbert 2002. A Robotic-PCR Detector for DNA-based Life on Other Planets, in Signs of Life: A Report based on the April 2000 Workshop on Life Detection Techniques. Ruimtewetenskapperaad, NASA.

62. Wolkow CA, Munoz MJ, Riddle DL, G Ruvkun 2002. Insulienreseptorsubstraat en p55 ortoloë adapterproteïene funksioneer in die Caenorhabditis elegans daf-2/insulienagtige seinweg. J Biol Chem. 277:49591-7. PMID: 12393910

63. Lee SS, Lee, RY, Fraser, AG, Kamath, RS, Ahringer, J en G Ruvkun 2002. 'n Sistematiese RNAi-skerm identifiseer 'n kritieke rol vir mitochondria in C. elegans lang lewe. Nature Genetics, 33:40-8. PMID: 12447374

64. Ashrafi K, Chang, FY, Watts, JL, Fraser, AG, Kamath, RS, Ahringer, J en G Ruvkun 2003. Genoomwye RNAi-analise van C. elegans vetregulerende gene. Nature, 421:268-72. PMID: 12529643

65. Li W en G Ruvkun 2003. daf-28 kodeer a C. elegans insulien-superfamilielid wat deur omgewingsaanwysings gereguleer word en in die DAF-2-seinweg optree. Gene en Ontwikkeling, 17: 844-58. PMCID: PMC196030

66. Bashirullah A, Pasquinelli, AE Kiger, A, Perrimon, N, Ruvkun, G, en C S Thummel 2003. Koördineer regulering van klein temporale RNA's by die aanvang van Drosophila metamorfose. Ontwikkelingsbiologie, 259:1-8. PMID: 12812783

67. Pasquinelli AE, McCoy, A Jimenez, E Salo, G Ruvkun, M Martindale, en J Baguñà 2003. Uitdrukking van die 22-nukleotied laat-7 heterochroniese RNA regdeur die Metazoa: 'n Rol in lewensgeskiedenis-evolusie? Evolusie en Ontwikkeling, 5:372-378. PMID: 12823453

68. Aspöck G, G Ruvkun en T Bürglin 2003. Die Caenorhabditis elegans ems klas homeobox geen ceh-2 is nodig vir M3 farinks motoneuron funksie. Ontwikkeling, 130:3369-3378. PMID: 12810585

69. Lee SS, Kennedy,S, Tolonen, AC en G Ruvkun 2003. DAF-16-teikengene wat beheer C. elegans lewensduur en metabolisme. Wetenskap. 300:644-7. PMID: 12690206

70. Grad Y, Aach, J, Hayes, GD, Reinhart, B, Church, GM, Ruvkun, G, en J Kim. 2003. Rekenkundige en eksperimentele identifikasie van C. elegans mikroRNA's. Molecular Cell, 11:1253-63. PMID: 12769849

71. Garsin DA. JM Villanueva, J Begun, DH Kim, CD Sifri, SB Calderwood, G Ruvkun en FM Ausubel 2003. Langlewe Caenorhabditis elegans daf-2 mutante is bestand teen bakteriële patogene, Science, 300:1921. PMID: 12817143

72. Ruvinsky I en G Ruvkun 2003. Funksionele toetse van versterkerbewaring tussen ververwante spesies, Development, 130:5133-42. PMID: 12944426

73. Sze JY en G Ruvkun 2003. Aktiwiteit van die Caenorhabditis elegans UNC-86 POU transkripsie faktor moduleer olfaktoriese sensitiwiteit, Proc. Natl. Acad. Sci., 100:9560-5. PMCID: PMC170957

74. Kim J, Krichevsky, A, Grad, Y, Hayes, GD, Kosik, KS, Church, GM, en G Ruvkun 2004. Identifikasie van baie mikroRNA's wat saamsuiwer met poliribosome in soogdierneurone. Proc. Natl. Acad. Sci.101: 360-5. PMCID: PMC314190

75. Kennedy SK, D Wang en G Ruvkun 2004. 'n Gekonserveerde siRNA-afbrekende RNase reguleer RNA-inmenging negatief in C. elegans. Nature 427: 645-9. PMID: 14961122

76. Tewari M, Hu PJ, Ahn JS, Ayivi-Guedehoussou N, Vidalain PO, Li S, Milstein S, Armstrong CM, Boxem M, Butler MD, Busiguina S, Rual JF, Ibarrola N, Chaklos ST, Bertin N, Vaglio P, Edgley ML, King KV, Albert PS, Vandenhaute J, Pandey A, Riddle DL, Ruvkun G, Vidal M 2004. Sistematiese interaktoomkartering en genetiese versteuringsanalise van 'n C. elegans TGF-beta seinnetwerk. Molecular Cell 13:469-82. PMID: 14992718

77. Mak HY en G Ruvkun 2004. Intersellulêre sein van reproduktiewe ontwikkeling deur die C. elegans DAF-9 sitochroom P450. Ontwikkeling, 131:1777-86. PMID: 15084462

78. Mansfield JH, Harfe BD, Nissen R, Obenauer J, Srineel J, Chaudhuri A, Farzan-Kashani R, Zuker M, Pasquinelli AE, Ruvkun G, Sharp PA, Tabin CJ, McManus MT 2004. MikroRNA-responsiewe 'sensor' transgene ontbloot Hox-agtige en ander ontwikkelingsgereguleerde patrone van vertebrate mikroRNA uitdrukking. Nat Genet. 36:1079-83. PMID: 15361871

79. Wang D en G Ruvkun 2004. Die insulienbaan reguleer RNAi in C. elegans. Cold Spring Harbor Simposium on Quantitative Biology, 69ste uitgawe, 69: 429-433.

80. Kim JK, HW Gabel, RS Kamath, M Tewari, A Pasquinelli, S Kennedy, M Dybbs, N Bertin, M Vidal, JM Kaplan en G Ruvkun 2005. Funksionele genomiese analise van RNA-interferensie in C. elegans. Wetenskap 308: 1164-7. PMID: 15790806

81. Efimenko E, Bubb K, Mak HY, Holzman T, Leroux MR, Ruvkun G, Thomas JH, Swoboda P 2005. Ontleding van xbx gene in C. elegans. Ontwikkeling. 132:1923-34. PMID: 15790967

82. Hamilton B, Y Dong, M Shindo, W Liu, G Ruvkun en SS Lee 2005. 'n Sistematiese RNAi-skerm vir langlewendheidsgene in C. elegans. Gene en Ontwikkeling 19:1544-55. PMCID: PMC1172061

83. Sieburth D, Q Ch ng, M Dybbs, M Tavazoie, S Kennedy, D Wang, D Dupuy, J Rual, D Hill, M Vidal, G Ruvkun, en J Kaplan 2005. Sistematiese analise van gene wat benodig word vir sinapsstruktuur en funksie. Nature 436: 510-517. PMID: 16049479

84. Wang DS, S Kennedy, D Conte, J Kim, H Gabel, R Kamath, C Mello, en G Ruvkun 2005. Somatiese wanuitdrukking van kiemlyn P-korrels en verbeterde RNA-interferensie in Retinoblastoma-wegmutante. Nature 436: 593-597. PMID: 16049496

85. Frand AR, S Russel, G Ruvkun 2005. Funksionele genomiese analise van C. elegans vervelling. PLoS Biol. 2005 Okt3(10):e312. doi: 10.1371/journal.pbio.0030312. Epub 2005 30 Aug.PMID: 16122351

86. Duchaine TF, JA Wohlschlegel, S Kennedy, Y Bei, D Conte, K Pang, DR Brownell, S Harding, S Mitani, G Ruvkun, JR Yates en CC Mello 2006. Funksionele proteomika openbaar die biochemiese nis van C. elegans DCR-1 in verskeie klein-RNA-gemedieerde paaie. Sel 124:343-54. PMID: 16439208

87. Mak HY, LS Nelson, M Basson, CD Johnson en G Ruvkun 2006. Poligeniese beheer van C. elegans vetopberging. Nature Genetics 38:363-8. PMID: 16462744

88. Sandoval GM, JS Duerr, J Hodgkin, JB Rand en G Ruvkun 2006. 'n Genetiese interaksie tussen die vesikulêre asetielcholien-vervoerder VAChT/UNC-17 en sinaptobrevin/SNB-1 in C. elegans. Nature Neuroscience, 9:599-601. PMID: 16604067

89. Hu PJ, J Xu, en G Ruvkun 2006. Twee membraan-geassosieerde tyrosine fosfatase homoloë potensieer C. elegans AKT-1/PKB sein. PLoS Genet. 2006 Jul2(7):e99. PMCID: PMC1487177

90. Hayes GD, AR Frand, en G. Ruvkun 2006. Die mir-84 en laat-7 paraloog mikroRNA gene van Caenorhabditis elegans lei die staking van molting via die bewaarde kernhormoonreseptore NHR-23 en NHR-25. Ontwikkeling 133: 4631-4641. PMID: 17065234

91. Ruvinsky I, U Ohler, CB Burge, en G Ruvkun 2006. Opsporing van wyd uitgedrukte neuronale gene in C. elegans. Dev Biol. 302: 617-26. PMID: 17046742

92. Hayes GD en G Ruvkun 2006. Misuitdrukking van die C. elegans miRNA laat-7 voldoende is om ontwikkelingsprogramme aan te dryf. Cold Spring Harbor Symp Quant Biol. 71:21-7. Regulerende RNA's. PMID: 17381276

93. Curran SP en G Ruvkun 2007. Lewensduurregulering deur evolusionêr bewaarde gene wat noodsaaklik is vir lewensvatbaarheid. PloS Genetika 3(4):e56. PMCID: PMC1847696

94. Kim N, Dempsey C, Kuan CJ, Zoval J, O'Rourke E, Ruvkun G, Madou M, J Sze 2007. Swaartekrag omgeskakel deur die MEC-4/MEC-10 DEG/ENaC-kanaal moduleer DAF-16/ FoxO aktiwiteit in C. elegans. Genetika. 177:835-45. PMCID: PMC2034647

95. Samuelson AV, Carr, CE, en G Ruvkun 2007. Geenaktiwiteite wat verhoogde lewensduur van C. elegans insulienagtige seinmutante. Gene en Ontwikkeling 21:2976-94. PMCID: PMC2049198

96. Parry DH, Xu, J en G Ruvkun 2007 'n Heel-genoom RNAi skerm vir C. elegans miRNA-weggene. Huidige Biologie 17: 2013-22. PMCID: PMC2211719

97. Isenbarger TA, M Finney, C Ríos-Velázquez, J Handelsman, en G Ruvkun 2007. Miniprimer PCR, 'n nuwe lens om die mikrobiese wêreld te bekyk. Appl Environ Microbiol. 2008 Feb74(3):840-9. PMCID: PMC2227730

98. Pierce ML, Weston MD, Fritzsch B, Gabel HW, Ruvkun G, Soukup GA 2008. MicroRNA-183-familiebewaring en gesilieerde neurosensoriese orgaanuitdrukking. Evol Dev. 10(1):106-13. PMCID: PMC2637451

99. Samuelson AV, RR Klimczak, D Thompson, CE Carr, en G Ruvkun 2008. Identifikasie van C. elegans gene wat langlewendheid reguleer deur gebruik te maak van verbeterde RNAi-sensitiewe stamme. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 200772:489-97. PMID: 18419309

100. Gabel HW en G. Ruvkun 2008. Die eksonuklease ERI-1 het 'n bewaarde dubbele rol in 5.8S rRNA verwerking en RNAi. Nat Struct Mol Biol. 15: 531-3. PMCID: PMC2910399

101. Patel DS, Fang LL, Svy DK, Ruvkun G, Li W 2008. Genetiese identifikasie van HSD-1, 'n bewaarde steroïdogene ensiem wat larvale ontwikkeling in rig Caenorhabditis elegans. Ontwikkeling. 135: 2239-49. PMID: 18495818

102. Simon DJ, Madison JM, Conery AL, Thompson-Peer KL, Soskis M, Ruvkun G, Kaplan JM, Kim JK 2008. Die mikroRNA miR-1 reguleer 'n MEF-2-afhanklike retrograde sein by neuromuskulêre aansluitings. Sel 133: 903-15. PMCID: PMC2553566

103. Fischer SEJ, MD Butler, Q Pan en G Ruvkun 2008. Trans-splyting in C. elegans genereer die negatiewe RNAi reguleerder ERI-6/7. Nature 455: 491-6. PMCID: PMC2756026

104. Wang MC, E O'Rourke en G Ruvkun 2008. Vetmetabolisme verbind kiemlyn stamselle en lang lewe in C. elegans. Wetenskap 322: 957-60. PMCID: PMC2760269

105. Isenbarger TA, CE Carr, SS Johnson, M Finney, GM Church, W Gilbert, MT Zuber en G Ruvkun 2008. Die mees bewaarde genoomsegmente vir lewensopsporing op Aarde en ander planete, Oorsprong van Lewe en Evolusie van Biosfere, 38(6):517-33. 14 Okt. PMID: 18853276

106. Soukas AA, EA Kane, CE Carr, JA Melo en G Ruvkun 2009. Rictor/TORC2 reguleer vetmetabolisme, voeding, groei en lewensduur in Caenorhabditis elegans. Gene en Ontwikkeling 23: 496-511. PMCID: PMC2648650

107. Butcher RA, JR Ragains, G Ruvkun, J Clardy, HY Mak. 2009 Biosintese van die C. elegans dauer feromoon. Proceedings of the National Academy of Sciences 106(6):1875-9. PMCID: PMC2631283

108. Curran SP, X Wu, C Riedel, en G Ruvkun 2009. 'n Soma-tot-kiemlyn-transformasie in langlewende C. elegans mutante. Nature 459: 1079-84. PMCID: PMC2716045

109. O'Rourke EJ, Soukas AA, Carr CE, G Ruvkun 2009. C. elegans hoofvette word gestoor in vesikels wat verskil van lisosoomverwante organelle. Sel Metab.10(5):430-5. PMCID: PMC2921818

110. Sebastiani P, Montano M, Puca A, Solovieff N, Kojima T, Wang MC, Melista E, Meltzer M, Fischer SE, Andersen S, Hartley SH, Sedgewick A, Arai Y, Bergman A, Barzilai N, Terry DF, Riva A, Anselmi CV, Malovini A, Kitamoto A, Sawabe M, Arai T, Gondo Y, Steinberg MH, Hirose N, Atzmon G, Ruvkun G, Baldwin CT, Perls TT 2009. RNA-redigeringsgene wat verband hou met uiterste ouderdom by mense en met lewensduur in C. elegans. PLoS Een. 2009 Des 144(12):e8210. PMCID: PMC2788130

111. Meli VS, Osuna B, Ruvkun G, Frand AR 2010. MLT-10 Definieer 'n familie van DUF644 en prolienryke herhaalde proteïene wat betrokke is by die molsiklus van Caenorhabditis elegans. Mol Biol Sel. Mei 1521(10):1648-61. PMCID: PMC2869372

112. Zhang C, TA Montgomery, HW Gabel, SE Fischer, CM Phillips, N Fahlgren, C Sullivan, JC Carrington, en G Ruvkun 2011. mut-16 en ander muteerder-klas gene moduleer 22G en 26G siRNA paaie in Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci., Jan 25108(4):1201-8. Epub Jan 18. PMCID: PMC3029761

113. Wang MC, W Min, G Ruvkun, XS Xie 2011. RNAi-sifting vir vetregulerende gene met SRS-mikroskopie. Natuur Metodes, 8 Feb(2):135-8. Epub Jan 16. PMCID: PMC3061290

114. Hayes GD, C Riedel, en G Ruvkun 2011. Die Caenorhabditis elegans SOMI-1 sinkvingerproteïen en SWI/SNF bevorder regulering van ontwikkeling deur die mir-84 mikroRNA. Gene Dev. Okt 125(19):2079-92. PMCID: PMC3197206

115. Fischer SEJ, TA Montgomery, C Zhang, N Fahlgren, A Hwang, CM Sullivan, JC Carrington en G Ruvkun 2011. Die ERI-6/7-helikase tree op in die eerste stadium van 'n siRNA-amplifikasiepad wat onlangse geenduplisering teiken. PLoS Genet. Nov7(11):e1002369. Epub 10 Nov. PMCID: PMC3213143

116. Russel S, AR Frand en G Ruvkun 2011. Regulering van die C. elegans verrot deur pqn-47. Ontwikkelingsbiologie 360: 297-309. PMCID: PMC3618673

117. Kimura KD, Riddle DL, en G. Ruvkun 2011 Die C. elegans DAF-2 insulienagtige reseptor word volop in die senuweestelsel uitgedruk en gereguleer deur voedingstatus. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 76:113-20. Epub 28 Nov. PMID: 22123849

118. Wu X, Z Shi, M Cui, M Han en G. Ruvkun 2012. Onderdrukking van kiemlyn RNAi paaie in somatiese selle deur retinoblastoom pad chromatien komplekse. PLoS Genet. Mrt8(3):e1002542. Epub 2012 8 Maart. PMCID: PMC3297578

119. Shi Z en G. Ruvkun 2012. Die mevalonaatweg reguleer mikroRNA-aktiwiteit in Caenorhabditis elegans. Proc Natl Acad Sci U S A. Mar 20109(12):4568-73. Epub Maart 6. PMCID: PMC3311396

120. Montgomery TA, Rim, E, Zhang, C, Dowen RH, Phillips CM, Fischer, SEJ en G. Ruvkun 2012. PIWI-geassosieerde siRNAs en piRNAs vereis spesifiek die C. elegans HEN1 ortoloog henn-1. PLoS Genetika, Apr8(4):e1002616. Epub Apr 19. PMCID: PMC3334881

121. Melo JA en G Ruvkun 2012. Inaktivering van bewaar C. elegans gene betrek patogeen- en xenobiotiese-geassosieerde verdediging. Sel 149:452-66. PMCID: PMC3613046

123. Zhang C, TA Montgomery, SE Fischer, SM Garcia, CG Riedel, N Fahlgren, CM Sullivan, JC Carrington en G Ruvkun 2012. Die Caenorhabditis elegans RDE-10/RDE-11-kompleks reguleer RNAi deur sekondêre siRNA-amplifikasie te bevorder. Current Biology 22:881-90. Epub 26 Apr. PMCID: PMC3371361

124. Phillips CM, PC Breen, TA Montgomery en G Ruvkun 2012. MUT-16 bevorder vorming van perinukleêre mutatorfokuspunte wat nodig is vir RNA-stilte in die C. elegans kiemlyn. Gene en Ontwikkeling 26:1433-44. Epub Junie 19. PMCID: PMC3403012

125. Shore DE, CE Carr en G Ruvkun 2012. Induksie van sitoprotektiewe paaie is sentraal tot die verlenging van lewensduur wat deur veelvuldige langlewendheidsweë verleen word. PloS Genetika 8(7):e1002792. PMCID: PMC3400582

126. Wählby C, Kamentsky L, Liu ZH, Riklin-Raviv T, Conery AL, O'Rourke EJ, Sokolnicki KL, Visvikis O, Ljosa V, Irazoqui JE, Golland P, Ruvkun G, Ausubel FM, Carpenter AE 2012. beeldanalise gereedskapkas vir hoë deurset C. elegans toetse Nat Metodes 9:714-6. doi: 10.1038/nmeth.1984. PMCID: PMC3433711

127. Tacutu R, Shore DE, Budovsky A, de Magalhães JP, Ruvkun G, Fraifeld VE, Curran SP. Voorspelling van C. elegans Longevity Genes by Human and Worm Longevity Networks 2012. PLoS One 20127(10):e48282. doi: 10.1371/journal.pone.0048282. Epub 2012 29 Okt. PMCID: PMC3483217

128. Carr CE, H Rowedder, C Vafadari, CS Lui, E Cascio, MT Zuber, en G Ruvkun 2013. Stralingsweerstand van biologiese reagense vir in-situ lewe opsporing. Astrobiologie Jan13(1):68-78. doi: 10.1089/ast.2012.0869. PMID: 23330963

129. Tabach Y, A Billi, G Hayes, O Zuk, H Gabel, R Kamath, M Newman, K Yacoby, B Chapman, M Borowsky, J Kim, en G Ruvkun 2013. Identifikasie van klein RNA-weggene met behulp van filogenetiese patrone bewaring en divergensie. Natuur Jan 31493(7434):694-8. doi: 10.1038/nature11779. Epub 2012 23 Des. PMCID: PMC3762460

130. Shi Z, T Montgomery, Y Qi en G Ruvkun 2013. Hoë-deurset volgordebepaling openbaar buitengewone vloeibaarheid van miRNA, piRNA en siRNA paaie in nematodes. Genoomnavorsing Mar23(3):497-508. doi: 10.1101/gr.149112.112. Epub 2013 30 Jan. PMCID: PMC3589538

131. O'Rourke EA, P Kuballa, R Xavier en G Ruvkun 2013. w-6 Poli-onversadigde vetsure verleng lewensduur deur die aktivering van outofagie. Gene en Ontwikkeling Feb 1527(4):429-40. doi: 10.1101/gad.205294.112. Epub 7 Feb. PMCID: PMC3589559

132. Riedel CG, G Lima, NV. Kirienko, T Heimbucher, JA West, A Dillin, J Asara en G Ruvkun 2013. DAF-16 gebruik die chromatienhermodelleerder SWI/SNF om stresweerstand en langlewendheid te bevorder. Nature Sel Biology, 2013 Mei15(5):491-501. doi: 10.1038/ncb2720. Epub 21 Apr. PMCID: PMC3748955

133. Kirienko NV, DR Kirienko, J Larkins-Ford, C Wählby, G Ruvkun, FM Ausubel 2013 Pseudomonas aeruginosa ontwrig Caenorhabditis elegans ysterhomeostase, wat 'n hipoksiese reaksie en dood veroorsaak. Selgasheer en mikrobe, 13(4):406-16. doi: 10.1016/j.chom.2013.03.003. PMCID: PMC3641844

134. O'Rourke EA en G Ruvkun 2013. MXL-3 en HLH-30 koppel lipolise en autofagie transkripsie aan die beskikbaarheid van voedingstowwe. Nature Sel Biology, 2013 Jun15(6):668-76. doi: 10.1038/ncb2741. Epub 2013 21 Apr. PMCID: PMC3723461

135. Carr CE, Rowedder H, Lui CS, Zlatkovsky I, Papalias CW, Bolander J, Myers JW, Bustillo J, Rothberg JM, Zuber MT, en G Ruvkun 2013. Stralingsweerstand van opeenvolgingskyfies vir lewensopsporing in situ. Astrobiologie. 4 Junie 2013. PMID: 23734755

136. Shi Z, G Hayes en G Ruvkun 2013. Dubbele regulering van die lin-14 teiken mRNA deur die lin-4 miRNA. PloS One, 138 Sep(9):e75475. doi: 10.1371/journal.pone.0075475. PMCID: PMC3772890

137. Tabach Y, T Golan, A Hernández-Hernández AR Messer, T Fukuda, A Kouznetsova, JG Liu, I Lilienthal, C Levy, en G Ruvkun 2013. Menslike siekte lokus ontdekking en kartering na molekulêre paaie deur filogenetiese profilering. Molekulêre Stelselbiologie, 19 Okt:692.doi: 10.1038/msb.2013.50. PMCID: PMC3817400

138. Soukas AA, CE Carr, en G Ruvkun 2013. Genetiese regulering van C. elegans Lysosoomverwante organelfunksie. PloS Genetika, 9 Okt(10):e1003908. doi: 10.1371/journal.pgen.1003908. Epub 24 Okt. PMCID: PMC3812091

139. Fischer SEJ, Q Pan, PC. Breen, Y Qi, Z Shi, C Zhang, TA Montgomery en G Ruvkun 2013. Veelvuldige klein RNA-paaie reguleer die stilmaak van herhaalde en vreemde gene in C. elegans. Gene en Ontwikkeling, 2013 Des 1527(24):2678-95. doi: 10.1101/gad.233254.113, PMCID: PMC3877757

140. Schwartz S, Agarwala SD, Mumbach MR, Jovanovic M, Mertins P, Shishkin A, Tabach Y, Mikkelsen TS, Satija R, Ruvkun G, Carr SA, Lander ES, Fink GR, Regev A. 2013. Hoë-resolusie kartering openbaar 'n bewaarde, wydverspreide, dinamiese mRNA-metileringsprogram in gismeiose. Sel. 2013 Des 5155(6):1409-21. doi: 10.1016/j.cell.2013.10.047. Epub 2013 21 Nov. PMCID: PMC3956118

141. Liu Y, BS Samuel, PC Breen en G Ruvkun 2014. Caenorhabditis elegans paaie wat mitochondria bewaak en verdedig. Natuur. 2014 Apr 17508(7496):406-10. doi: 10.1038/nature13204. Epub 2014 2 Apr. PMCID: PMC4102179

142. Phillips CM, Rim Y, Roovers, E, Breen PC, Ohsumi, TK, van Wolfswinkel, JC, Ketting, RF, Ruvkun, G, TA Montgomery 2014. MUT-14 en SMUT-1 DEAD box RNA helikses het oorvleuelende rolle in kiemlyn RNAi en endogene siRNA vorming. Curr Biol. 2014 Apr 1424(8):839-44. doi: 10.1016/j.cub.2014.02.060. Epub 2014 27 Maart. PMCID: PMC4010136

143. Garcia SMDA, Y Tabach, G Lourenço en G Ruvkun 2014. Identifikasie van gene in toksisiteitsweë van trinukleotied-herhaal-RNA in C. elegans. Nature Strukturele en Molekulêre Biologie, 2014 Aug21(8):712-20. doi: 10.1038/nsmb.2858. Epub 2014 Julie 20.PMID: 25038802.

144. Wang MC, HD Oakley, CE Carr, JN Sowa, G Ruvkun 2014. Geenpaaie wat vertraag Caenorhabditis elegans reproduktiewe veroudering. PLoS Genet. 2014 Des 410(12):e1004752. doi: 10.1371/journal.pgen.1004752. e-versameling 2014 Desember PMID: 25474471

145. Kirienko NV, FM Ausubel, en G Ruvkun 2015. Mitofagie verleen weerstand teen siderofoor-bemiddelde doodmaak deur Pseudomonas aeruginosa. Proc Natl Acad Sci U S A., 2015 Feb 10112(6):1821-6. doi: 10.1073/pnas.1424954112. Epub 2015 26 Jan. PMID:25624506

146. Sadreyev IR, Ji F, Cohen E, Ruvkun G, Tabach Y. 2015. PhyloGene-bediener vir identifikasie en visualisering van mede-ontwikkelende proteïene met behulp van genormaliseerde filogenetiese profiele. Nukleïensure Res. 143 Julie (W1):W154-9. doi: 10.1093/nar/gkv452. Epub 2015 9 Mei. PMID: 25958392

147. Phillips CM, Brown KC, Montgomery BE, Ruvkun G, Montgomery TA. 2015. piRNAs en piRNA-afhanklike siRNAs beskerm bewaar en noodsaaklik C. elegans gene van verkeerde roetes na die RNAi-baan. Ontwikkelaarsel. 2015 Aug 2434(4):457-65. doi: 10.1016/j.devcel.2015.07.009. Epub 2015 13 Aug.PMID:26279487

148. Govindan JA, E Jayamani, X Zhang, P Breen, J Larkins-Ford, E Mylonakis en G Ruvkun. 2015. Lipied sein koppel translasie toesig aan sistemiese ontgifting in Caenorhabditis elegans. Nat Cell Biol. 2015 Okt17(10):1294-303. doi: 10.1038/ncb3229. Epub 2015 31 Aug.PMID: 26322678

149. Govindan JA, Jayamani E, Zhang X, Mylonakis E, en G Ruvkun. 2015. Dialoog tussen E. coli vrye radikale paaie en die mitochondria van C. elegans. Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Sep 21. pii: 201517448. PMID: 26392561

150. Rettberg P, Anesio AM, Baker VR, Baross JA, Cady SL, Detsis E, Foreman CM, Hauber E, Ori GG, Pearce DA, Renno NO, Ruvkun G, Sattler B, Saunders MP, Smith DH, Wagner D, Westall F. 2016. Planetêre Beskerming en Mars Spesiale Streke-'n Voorstel vir die opdatering van die definisie. Astrobiologie. 2016 Feb16(2):119-25. doi: 10.1089/ast.2016.1472. PMID: 26848950.

151. Samuel BS, H Rowedder, C Braendle, MA Félix, G Ruvkun. 2016. Caenorhabditis elegans reaksies op bakterieë uit sy natuurlike habitatte. Proc Natl Acad Sci U S A., 2016.. pii: 201607183. PMID:27317746

152. Dowen RH, PC Breen, T Tullius, AL Conery, en G Ruvkun. 2016. 'n MikroRNA-program in die C. elegans hipodermis koppel aan intestinale mTORC2/PQM-1-sein om vetvervoer te moduleer. Gene Dev. 2016 Jul 130(13):1515-28. doi: 10.1101/gad.283895.116. PMID: 27401555

153. Lehrbach NJ en G Ruvkun. 2016. Proteasome disfunksie snellers aktivering van SKN-1A/Nrf1 deur die asparaginale protease DDI-1. bioRxiv voordruk aanlyn geplaas Mei. 12, 2016 doi: http://dx.doi.org/10.1101/052936. Elife. 2016 Aug 165. pii: e17721. doi: 10.7554/eLife.17721. PMID: 27528192

154. Mojarro A, Ruvkun G, Zuber MT, Carr CE. Nukleïensuuronttrekking uit Sintetiese Mars-analooggronde vir in situ-lewensopsporing. Astrobiologie. 2017 13 Jul. doi: 10.1089/ast.2016.1535. PMID: 28704064

155. Pontefract A, TF Zhu, VK Walker, H Hepburn, C Lui, MT Zuber, G Ruvkun en CE Carr. 2017. Mikrobiese diversiteit in 'n hipersoute sulfaatmeer: ​​'n aardse analoog van antieke Mars. Frontiers in Microbiology, afdeling Ekstreme Mikrobiologie, Front Microbiol. 2017 Sep 268:1819. doi: 10.3389/fmicb.2017.01819. e-versameling 2017. PMID: 29018418

156. Mojarro A, J Hachey, G Ruvkun, MT Zuber, & CE Carr. 2018. CarrierSeq: 'n volgorde-analise-werkvloei vir lae-insette nanopore-volgordebepaling. BMC Bioinformatika. 2018 Mrt 2719(1):108. doi: 10.1186/s12859-018-2124-3. PMID: 29587645

157. Newman MA, Ji F, Fischer SEJ, Anselmo A, Sadreyev RI, G Ruvkun. 2018. Die toesig van pre-mRNA-splyting is 'n vroeë stap in C. elegans RNAi van endogene gene. Gene Dev. 2018 Mei 132(9-10):670-681. doi: 10.1101/gad.311514.118. Epub 2018 8 Mei. PMID: 29739806

158. Alexander JK, JR Casani, L Chiao, DP Fidler, J Gabrynowicz, GS Hubbard, EH Levy, N Noonan, K Olden, F Raulin, G Ruvkun, MP Saunders, BA Simmons, PD Stabekis, A Steele, DH Smith. 2018. Hersiening en Assessering van Planetêre Beskermingsbeleid Ontwikkelingsprosesse. Komitee oor die Hersiening van Planetêre Beskermingsbeleid Ontwikkelingsprosesse, Ruimtestudieraad. https://doi.org/10.17226/25172.

159. Carr CE, NC Bryan, KN Saboda, SA Bhattaru, G Ruvkun, MT Zuber. 2018. Versnellingsprofiele en verwerkingsmetodes vir paraboliese vlug NPJ Microgravity. 2018 Aug 74:14. doi: 10.1038/s41526-018-0050-3. e-versameling 2018. PMID: 30109261

160. Pontefract A, Hachey J, Zuber MT, Ruvkun G, Carr CE 2018. Opeenvolging van niks: Verkenning van mislukkingsmodusse van nanopore-waarneming en implikasies vir lewensopsporing. Life Sci Space Res (Amst). 2018 Aug18:80-86. doi: 10.1016/j.lssr.2018.05.004. Epub 2018 16 Mei. PMID: 30100151

161. Tillman EJ, Richardson CE, Cattie DJ, Reddy KC, Lehrbach NJ, Droste R, Ruvkun G, Kim DH. 2018. Endoplasmiese retikulum homeostase word gemoduleer deur die vurkkop-transkripsiefaktor FKH-9 tydens infeksie van Caenorhabditis elegans.Genetika. 2018 Des210(4):1329-1337. doi: 10.1534/genetika.118.301450. Epub 2018 4 Okt. PMID:30287474

162. Lin XX, Sen I, Janssens GE, Zhou X, Fonslow BR, Edgar D, Stroustrup N, Swoboda P, Yates JR 3rd, Ruvkun G, Riedel CG. DAF-16/FOXO en HLH-30/TFEB funksioneer as kombinatoriese transkripsiefaktore om stresweerstand en langlewendheid te bevorder. Nat Commun. 2018 Okt 239(1):4400. doi: 10.1038/s41467-018-06624-0. PMID: 30353013

163. Kniazeva M en G Ruvkun. 2019. Rhizobium veroorsaak DNA-skade in Caenorhabditis elegans dermselle. Proceedings of the National Academy of Sciences, Proc Natl Acad Sci U S A. 2019 Feb 26116(9):3784-3792. doi: 10.1073/pnas.1815656116. Epub 2019 11 Feb. PMID: 30808764

164. Mao K, F Ji, PC Breen, A Sewell, M Han, R Sadreyev, en G Ruvkun. 2019. Mitochondriale disfunksie in C. elegans aktiveer mitochondriale herlokalisering en kernhormoonreseptor-afhanklike ontgiftingsgene. Sel Metab. 2019 Feb 14. pii: S1550-4131(19)30022-1. doi: 10.1016/j.cmet.2019.01.022. [Epub voor druk] PMID: 30799287

165. Warnhoff K en G Ruvkun. 2019. Molibdeen-kofaktoroordrag van bakterieë na nematode bemiddel sulfietontgifting. Nat Chem Biol. 2019 Mei15(5):480-488. doi: 10.1038/s41589-019-0249-y. Epub 2019 25 Maart. PMID: 30911177

166. Lehrbach NJ en G Ruvkun. 2019. ER-geassosieerde SKN-1A/Nrf1 bemiddel 'n sitoplasmiese ontvoude proteïenrespons en bevorder langlewendheid. Elife. 2019 118 April. pii: e44425. doi: 10.7554/eLife.44425. PMID: 30973820

167. Lehrbach NJ, PC Breen en G Ruvkun. 2019. Proteïenvolgorde redigering van SKN-1A/Nrf1 deur peptied:N-glikanase beheer proteasoom geenuitdrukking. Sel. 2019 Apr 18177(3):737-750.e15. doi: 10.1016/j.cell.2019.03.035. PMID: 31002798

168. Ast T, Meisel JD, Patra S, Wang H, Grange RMH, Kim SH, Calvo SE, Orefice LL, Nagashima F, Ichinose F, Zapol WM, Ruvkun G, Barondeau DP, Mootha VK. 2019 Hipoksie red Frataxin-verlies deur die biogenese van yster Swaelgroepering te herstel. Sel. 2019 Apr 23. pii: S0092-8674(19)30346-0. doi: 10.1016/j.cell.2019.03.045. [Epub voor druk] PMID: 31031004

169. Mojarro A, J Hachey, R Bailey, M Brown, R Doebler, G Ruvkun, MT Zuber, en CE Carr. Nukleïensuur-ekstraksie en volgordebepaling van sintetiese Mars-analooggronde met 'n lae biomassa vir in situ-lewensopsporing. Astrobiologie, 2019 Jun 11. doi: 10.1089/ast.2018.1929. [Epub voor druk] PMID:31204862

170. Armakola M en G Ruvkun 2019. Regulering van Caenorhabditis elegans neuronale polariteit deur heterochroniese gene. Proc Natl Acad Sci U S A. 2019 Junie 4. pii: 201820928. doi: 10.1073/pnas.1820928116. [Epub voor druk] PMID:31164416

171. Govindan, JA, E Jayamani, en G Ruvkun. 2019. ROS-gebaseerde dodelikheid van C. elegans mitochondriale elektrontransportmutante gegroei op E. coli siderofoor ystervrystellingsmutante Proc Natl Acad Sci U S A. 2019 7 Okt. pii: 201912628. doi: 10.1073/pnas.1912628116. [Epub voor druk] PMID:31591219

172. Fischer, SEJ en G Ruvkun. 2020. Caenorhabditis elegans ADAR redigering en die ERI-6/7/MOV10 RNAi pad stil endogene virale elemente en LTR retrotransposons. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020 Mar 17117(11):5987-5996. doi: 10.1073/pnas.1919028117. Epub 2020 2 Maart. PMID: 32123111

173. Wei W en Gary Ruvkun 2020. Lysosomale aktiwiteit reguleer Caenorhabditis elegans mitochondriale dinamika deur vitamien B12-metabolisme bioRxiv 2020.04.20.049502 doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.20.049502. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020 Aug 18117(33):19970-19981. doi: 10.1073/pnas.2008021117. Epub 2020 31 Jul.PMID: 32737159

174. Carr, CE, NC Bryant, KN Saboda, SA Bhattaru, G Ruvkun MT Zuber 2020. Nanopore-volgordebepaling by Mars, Europa en mikroswaartekragtoestande npj Mikroswaartekrag 6: 24

175. Govindan, JA, E Jayamani, V Lelyveld, J Szostak, en G Ruvkun. 2020. Bakteriële karotenoïede onderdruk Caenorhabditis elegans toesig en verdediging van translasiedisfunksie. bioRxiv 2020.01.08.898668 doi: https://doi.org/10.1101/2020.01.08.898668

176. Mao K, P Breen, G Ruvkun 2020. Mitochondriale disfunksie veroorsaak RNA-inmenging in C. elegans deur 'n pad wat homoloog is aan die soogdier RIG-I antivirale reaksie. PLoS Biol. 2020 Des 218(12):e3000996. doi: 10.1371/journal.pbio.3000996. Aanlyn voor druk.PMID: 33264285

177. Charlesworth, AG, NJ Lehrbach, U Seroussi, MS Renaud, RI Molnar, JR Woock, MJ Aber, AJ Diao, G Ruvkun, JM Claycomb. 2020. Twee isovorme van die noodsaaklike C. elegans Argonaute CSR-1 reguleer sperm- en oösietvrugbaarheid differensieel deur verskillende klein RNA-klasse. bioRxiv 2020.07.20.212050.

178. Warnhoff, K, TW. Hercher, RR Mendel, G Ruvkun Proteïengebonde molibdeen kofaktor is biobeskikbaar en red molibdeen kofaktor-tekort C. elegans, in pers Genes and Development. bioRxiv 2020.10.08.332338 doi: https://doi.org/10.1101/2020.10.08.332338

Navorsingsondersteuning

5 R01GM44619-27 NIH Beheer van C. elegans afstamming deur heterochroniese gene. 05/01/1991 - 30/11/20. Direkte koste $379,000 $648,090 Totale koste per jaar, 30% moeite.

5 R01 AG16636-21 NIH Genetiese en molekulêre basis van lang lewe. 04/01/1999 - 28/02/21. 20% moeite. $262,835 Direkte koste, $457,333 Totale koste.

5 R01 AG043184-23 NIH Inositol sein in C. elegans senesensie en diapouse. 20% moeite. 05/01/1996 - 03/31/2022 Begrotingstydperk: 09/01/2017 – 03/31/2018 Projektydperk: 08/15/2012 – 03/31/2022 Direkte koste $276,999 Totale koste $473,668.

Grace Science Foundation: Regulering van die proteasoom deur PNG-1/NGLY1 Hoofondersoeker: Gary Ruvkun Totale toekenningsbedrag: $100 000 Begindatum: 14 Oktober 2016 Einddatum: 31 Des. 2020

Friedreich se Ataxia Accelerator Ondersteun die navorsing oor die yster swael tros samestelling faktor geen frh-1 navorsing.
VOORSTEL NOMMER: 2020A011058 09/01/2020 tot 14/07/2023

NASA NNH14ZDA001NMATISSE. 'n Soek na buiteaardse genome (SETG): 'n In-situ detektor vir lewe op Mars wat voorvaderlik verband hou met lewe op aarde. PI: Maria Zuber 5% moeite. Ruvkun mede-I, 5% poging. Volwasse SETG ter voorbereiding vir toekomstige vlug. Demonstreer ekstraksie en suiwering van nukleïensure, gevolg deur enkel-molekule nanopore-volgordebepaling van DNA. Jaar 1 $970 392,25 1 Mei 2015 tot 30 Apr 2015. Jaar 2 $958 467,88 1 Mei 2016 tot 30 Apr 2016, jaar 3 $998 199,79 1 Mei 2017 tot 80 Apr 2016.

Nadoktorale genootskapbefondsing aan Ruvkun-laboratorium:

1. Kurt Warnhoff, Damon Runyon Nadoktorale Genootskap (tot 21/6)

2. Josh Meisel, Jane Coffin Childs Nadoktorale Genootskap (tot 8/21) plus 'n K99 wat gaan begin.

Lente 2007 Genetika 206 (met Perrimon, Vidal). 6 lesings en bespreking.

Herfs en lente 2007, 2008 Lewenswetenskappe 190, Kursusdirekteur, by Schrag, Kolter, Cavanaugh.

2004 tot 2012 mededirekteur, Biology of Aging somerkursus, Mariene Biologiese Laboratorium, Woods Hole

2016 Vier lesings Astronomy 305, Topics in Origin of Life Research.

Genooide aanbiedings 2017 tot 2020

2017 Jet Propulsion Laboratory, Caltech

2017 Salk Instituut RNA simposium

2017 Gordon-konferensie oor insuliensein, Ventura

2017 Universiteit van Kalifornië, Davis

2017 Universiteit van Kalifornië, Santa Cruz

2017 Universiteit van Alabama, Birmingham

2017 Grace Foundation, Palo Alto

2017 Universiteit van Texas Suidwes Mediese Sentrum

2017 Universiteit van Kalifornië, San Francisco, Biochemie en Biofisika

2017 Kanadese Instituut vir Gevorderde Navorsing, Toronto

2018 Sanford Burnham Seldsame Genetiese Siekte Simposium, San Diego

2018 James Watson 90ste verjaarsdag Cold Spring Harbor

2018 RNA bank tot bed, Universiteit van Massachusetts

2018 National Cancer Institute Distinguished Lesing Series

2018 Buck Institute 30 jaar van verouderingsnavorsingsimposium

2018-deurbraakbespreking, migrasie van lewe oor die sterrestelsel, Sentrum vir Astrofisika, Harvard

2019 Mars Monster Return Planetary Protection vergadering, Jet Propulsion Laboratory, Pasadena Caltech

2019 Deurbraakbespreking, Migrasie van lewe oor die sterrestelsel, Berkeley

2019 Kanadese Instituut vir Gevorderde Navorsing Santa Cruz vergadering

2019 Keystone Meeting oor Inflammasie en Metabolisme, Vancouver BC

2019 Gordon-navorsingskonferensie oor veroudering, Sondagsrivier Maine

2019 Ketsen-lesing, Andrus Aging Centre, USC

2020 Universiteit van Toronto, Donnelly Genome Centre

Patente uitgereik

1. Uitgereik 5/1/2001 Amerikaanse Patent # 6,225,120 Terapeutiese en diagnostiese hulpmiddels vir verswakte glukosetoleransietoestande.

2. Uitgereik 10/8/2002 US Patent # 6,461,854 Metodes van sifting van verbindings nuttig vir die voorkoming van infeksie of patogenisiteit.

3. Uitgereik 8/19/2008 US Patent # 7,414,169 Terapeutiese en diagnostiese hulpmiddels vir verswakte glukosetoleransie toestande

Patentaansoeke

WO-2020162959-A1

Karotenoïede vir die behandeling of voorkoming van naarheid

VS-2019255124-A1

Samestellings en metodes vir die verbetering van mitochondriale funksie

EP-3677909-A1

Metodes en samestellings om ontgiftingsreaksie te inhibeer

VS-2019024080-A1

Metodes en samestellings om ontgiftingsreaksie te inhibeer

VS-2017023551-A1

Gereedskap en metodes vir die teiken van oligonukleotied Herhaal RNA toksisiteit

US-2007087378-A1

Polinukleotied- en polipeptiedvetmetabolismereguleerders en gebruike daarvan

US-2005260652-A1

Samestellings en metodes wat RNA-interferensie moduleer

WO-2005074560-A3

Samestellings en metodes wat rna-interferensie verbeter

WO-2004113501-A2

Metodes en samestellings wat verband hou met lipiedophoping

WO-2004061087-A2

Metodes en samestellings van ecdysozoan molt inhibisie

US-2003086871-A1

Metodes van sifting van verbindings wat nuttig is vir die voorkoming van infeksie of patogenisiteit

US-2003181364-A1

Terapeutiese en diagnostiese hulpmiddels vir verswakte glukosetoleransie toestande

US-7414169-B2

Terapeutiese en diagnostiese hulpmiddels vir verswakte glukosetoleransie toestande

Metodes vir sifting van verbindings wat nuttig is vir die voorkoming van infeksie of patogenisiteit

HU-0002199-A2

Terapeutiese en diagnostiese hulpmiddels vir verswakte glukosetoleransie toestande

CA-2287839-A1

Terapeutiese en diagnostiese hulpmiddels vir verswakte glukosetoleransie toestande

Toetsprosedures van stowwe wat nuttig is vir die voorkoming van infeksie of patogenisiteit

HU-0002781-A2

Metodes van sifting van verbindings wat nuttig is vir die voorkoming van infeksie of patogenisiteit

VS-2001016332-A1

Ouderdom-1 polipeptiede en verwante molekules en metodes

EP-0828520-A1

Metodes van sifting van verbindings wat nuttig is vir die voorkoming van infeksie of patogenisiteit


Inleiding

Die mobilisering van vrye vetsure (FFA) vanaf gestoorde trigliseriede is 'n fundamentele sellulêre proses wat in baie weefsels bemiddel word deur die funksionele interaksie van alfa-beta-hidrolase-domein-bevattende 5 (ABHD5) met vettrigliseriedlipase (ATGL). ABHD5 nulmutasies ontwrig lipolise en lei tot ektopiese lipiedophoping in Arabidopsis 1 , C. elegans 2,3, muise 4,5 en mense (Chanarin-Dorfman-sindroom 6). ABHD5 is noodsaaklik vir ATGL-aktivering in vet en spiere waar dit ekstrasellulêre en intrasellulêre seine integreer in die beheer van lipolise 7,8,9. Boonop onderdruk lipase-aktivering deur ABHD5 kolonkankerprogressie 10,11 en bevorder hepatitis C virale replikasie 12.

Die strukturele determinante van ABHD5-aktivering van ATGL word swak verstaan. Alhoewel ABHD5 'n lid van die alfa-beta hidrolase familie is, het dit nie die seriennukleofiel van die konsensus katalitiese triade nie, en het dus 'n gebrek aan hidrolitiese aktiwiteit 8 . In adiposiete word die lipase-aktiverende funksie van ABHD5 onderdruk deur sy binding aan perilipien 1 (PLIN1), 'n lipieddruppel (LD) steier.Ekstrasellulêre seine wat proteïenkinase A (PKA) aktiveer lei tot fosforilering van PLIN1 en ABHD5 en stimuleer vrystelling van ABHD5, wat dan ATGL 7,13,14 aktiveer. Verder is ABHD5 die direkte teiken van endogene en sintetiese ligande wat sy lipase-aktiverende funksie moduleer deur sy interaksies met inhiberende PLIN-proteïene 9 te reguleer. Alhoewel ABHD5 ATGL 8,15 bind en PLIN proteïene indirek daardie interaksie 13,16,17,18 reguleer, bly die molekulêre basis van ATGL aktivering deur ABHD5 onduidelik.

Om insigte te kry in die meganisme van ATGL-aktivering, het ons vergelykende strukturele en evolusionêre analise uitgevoer van ABHD5 en ABHD4, 'n funksioneel-duidelike paralog wat teenwoordig is in soogdiere en beenvisse wat 50-55% volgorde-identiteit met ABHD5 deel. ABHD4 hidroliseer n-asielfosfatidielserien en n-asielfosfatidieletanolamien en bevorder nie ATGL-aktiwiteit nie 19,20. Ons het twee hoogs bewaarde ABHD5-aminosure (R299 en G328) geïdentifiseer wat nodig is vir ATGL-aktivering deur ABHD5 en voldoende is om daardie aktiwiteit in ABHD4 (ABHD4 N303R/S332G) moontlik te maak. Dit is belangrik dat analise van lipolise-onaktiewe ABHD5-mutante getoon het dat ATGL-aktivering geskei kan word van ATGL-translokasie na die LD-oppervlak en van ABHD5-interaksies met PLIN-proteïene en sintetiese ABHD5-ligande. Strukturele modellering gebaseer op vormanalise het 'n nuwe funksionele oppervlak in ABHD5 en wins-van-funksie ABHD4 geïdentifiseer wat die residue bevat wat krities is vir ATGL-aktivering.


Bespreking

Die fenotipe van menslike Fanconi-anemie-pasiënte dui aan dat die FA-baan belangrik is vir normale embrioniese ontwikkeling, die handhawing van genomiese stabiliteit en die bewaring van verskeie tipes stamselle (Auerbach et al. 2001). Die onlangse ontdekking dat die borskankergeen, BRCA2, is 'n FA-geen (Howlett et al. 2002) het hierdie seldsame afwyking aan 'n algemene vorm van kanker verbind. Nietemin bly die presiese funksie(s) van die FA/BRCA-weg onbekend (D'Andrea en Grompe 2003). Ons en ander het voorheen muisstamme geskep met geteikende delesies van die murien Fanca, Fancc, en Fancg gene, alle komponente van die FA-kernkompleks. Hierdie mutante het baie soortgelyke fenotipes (Chen et al. 1996 Whitney et al. 1996 Cheng et al. 2000 Yang et al. 2001 Koomen et al. 2002 Noll et al. 2002), wat 'n model ondersteun waarin die komponente van die kompleks deelneem in 'n gemeenskaplike funksie. Om te bepaal of Fancd2 slegs in vivo aan hierdie funksie deelneem of bykomende rolle het, het ons 'n muisstam met 'n nul-alleel in hierdie geen gegenereer.

Vroeëre studies het voorgestel dat FANCD2 unieke rolle kan hê wat verskil van die ander FA-proteïene. Eerstens tree dit stroomaf van die FA-kernkompleks op en is dit die teiken van die monoubiquitinering wat deur die kompleks bemiddel word (Garcia-Higuera et al. 2001 Timmers et al. 2001). Gevolglik word die integriteit van die FA-kernkompleks nie in FA-D2-selle versteur nie, anders as in ander komplementeringsgroepe (Garcia-Higuera et al. 1999 de Winter et al. 2000c). Tweedens is FANCD2 die enigste FA-proteïen wat bekend is om kernfokusse te vorm na DNA-skade en om saam met die herstelproteïene BRCA1 en RAD51 te kolokaliseer (Garcia-Higuera et al. 2001 Taniguchi et al. 2002a). Laastens word FANCD2 direk deur OTM gefosforileer in reaksie op IR maar nie in reaksie op ICL's nie (Nakanishi et al. 2002 Taniguchi et al. 2002b). Ander FA-proteïene is nie bekend as teikens van die ATM-kinase nie.

Ten spyte van hierdie biochemiese verskille, verskil menslike FA-D2-pasiënte nie betekenisvol klinies van FA-pasiënte wat aan ander komplementeringsgroepe behoort nie (Timmers et al. 2001). FA-D2 is egter 'n seldsame komplementeringsgroep, en alle menslike pasiënte wat tot dusver gerapporteer is, het ten minste een mutante alleel wat die een of ander oorblywende funksie kan hê, en dus die fenotipe van 'n ware FANCD2-nul mutasie het onseker gebly. Die Fancd2 mutantmuise wat hier aangemeld word, vertoon al die kenmerke van voorheen gerapporteerde stamme van FA-uitklopmuise, maar het ook belangrike verskille.

Fancd2, ioniserende straling en die OTM-seinbaan

Ser 222 van menslike FANCD2 word gefosforileer deur ATM in reaksie op IR, en hierdie posttranslasionele modifikasie is gekorreleer met verhoogde IR sensitiwiteit in onsterflike fibroblaste (Taniguchi et al. 2002b). Daarbenewens was fosforilering van Ser 222 geassosieer met bestraling-geïnduseerde arrestasie van DNA-sintese. Daarom, om te toets of Fancd2 'n belangrike rol gespeel het in die reaksie op IR, die oorlewing van isogeniese, primêre selle van Fancc mutant en Fancd2 mutante selle is vergelyk. Interessant genoeg, Fancd2-nul selle was nie differensieel sensitief vir IR of ICLs in vergelyking met Fancc-nul selle. Verder, hoewel ligte hipersensitiwiteit vir IR in vivo waargeneem is (LD50 = ~9.5 Gy), was hierdie sensitiwiteit ook nie groter as waarvoor waargeneem is nie Fancc mutante muise (Noll et al. 2001).

Daarbenewens, en in teenstelling met Atm mutante, Fancd2-tekorte selle het nie stralingsweerstandige DNA-sintese getoon nie. Daarom, in muriene primêre selle, is Fancd2 nie nodig vir die OTM-gemedieerde S-fase arrestasie na IR nie. Algehele, die fenotipe van Fancd2 mutante muise verskil aansienlik van dié van Atm-nul muise, wat duidelike bestralingsensitiwiteit, immuungebrek en hematologiese gewasse vertoon (Xu et al. 1996). Saam stel ons waarnemings voor dat Fancd2 nie 'n beduidende rol speel in OTM-gemedieerde fisiologiese reaksies op IR nie. Miskien verskil menslike FANCD2 en muriene Fancd2 in hierdie aspek van hul funksie, hoewel die proteïene hoogs homoloog is en Ser 222 tussen die spesies bewaar word. Alternatiewelik kan Fancd2 'n rol speel as 'n bemiddelaar van OTM-funksie in slegs sekere spesifieke omstandighede, byvoorbeeld, T-antigeen onsterflike fibroblaste.

Nuwe fenotipes in Fancd2 uitklopmuise

Alhoewel Fancd2 mutante muise verskil nie meetbaar van Fancc mutante in terme van hul reaksie op DNA-skade, het hulle 'n paar kenmerke wat nie in gesien word nie Fanca, Fancc, of Fancg mutante diere. Hierdie fenotipes sluit in mikroftalmie, perinatale dodelikheid, meer ernstige hipogonadisme en tumorontwikkeling. Normale funksie van die FA-kernkompleks is nodig vir die monoubiquitinering van FANCD2 in reaksie op DNA-skade of DNA-replikasie (Garcia-Higuera et al. 2001 Taniguchi et al. 2002a). Daarom bestaan ​​twee basiese modelle om die divergensie van fenotipes tussen mutante in Fancd2 en kernkomplekse gene. Eerstens, nie-nubiquitinated Fancd2-proteïen, soos teenwoordig in Fanca, Fancc, en Fancg uitklopmuise, kan 'n mate van oorblywende aktiwiteit hê in die funksie wat algemeen is aan die FA-weg. In hierdie model sal uitklophoue van die kernkompleksgene soortgelyk wees aan hipomorfiese mutasies van die Fancd2 geen. Die fenotipes sal die gevolg wees van 'n tekort aan dieselfde biochemiese funksie, maar hulle sal ernstiger wees in Fancd2 mutante muise. In die tweede model is FANCD2 'n multifunksionele proteïen met 'n domein wat in die FA-baan funksioneer en ander domeine wat onverwante funksies bemiddel. Die bykomende fenotipes van Fancd2 mutante sal dan veroorsaak word deur 'n tekort aan hierdie bykomende funksies.

Die meeste van die kenmerke waargeneem in Fancd2-nul muise kan geïnterpreteer word as meer ernstige manifestasies van die kwalitatief soortgelyke defekte gesien in ander FA uitklophoue. Dit is die duidelikste met die kiemsel-defekte. Alhoewel testikulêre gewig duidelik meer aangetas word in Fancd2 mutante muise, is die histologie soortgelyk aan ander FA-modelle. Net so het ons mikroftalmie in die mutante nageslag van sommige waargeneem Fancc broeipare (M. Grompe, ongepubl.), wat aandui dat dit nie 'n werklik nuwe fenotipe is nie, maar 'n meer volledige manifestasie van 'n gebrek wat algemeen by alle FA-muise voorkom. Die verhoogde vatbaarheid van FA-selle vir apoptotiese seldood na DNA-skade kan 'n algemene verklaring bied vir die waargenome kiemsel-tekort, mikroftalmie, klein grootte en perinatale dodelikheid. In die geval van hierdie ontwikkelingsdefekte, sal die selle op spontane DNA-skade reageer. Algehele, die fenotipe van Fancd2 mutante muise bevestig nie die bestaan ​​van addisionele funksionele domeine in die Fancd2-proteïen oortuigend nie.

Fancd2, Brca2 en karsinome

Alhoewel menslike pasiënte met FA 'n verskeidenheid kankers ontwikkel, is gewasse nog nooit in die ander FA-uitklopmuise aangemeld nie, selfs wanneer dit tot baie laat ouderdomme gevolg is. Daarteenoor is dit goed vasgestel dat muise met 'n afkappende mutasie in Brca2 het 'n verhoogde risiko van 'n verskeidenheid neoplasmas (Connor et al. 1997 McAllister et al. 2002). Interessant genoeg is die tumorspektrum van die Brca2 hipomorfiese muise was vergelykbaar met dié wat in Fancd2 mutante (McAllister et al. 2002). In beide gevalle is 'n geneigdheid tot epiteelkanker gesien, en die ouderdom van aanvang was soortgelyk. Brca2 hipomorfiese muise het ook ander ooreenkomste soos 'n FA-agtige kiemsel-defek, klein grootte en perinatale dodelikheid. Saamgevat stem hierdie uitgebreide fenotipiese oorvleueling ooreen met die hipotese dat die C-terminale domein van Brca2 in dieselfde pad as Fancd2 funksioneer.

Dit is bekend dat menslike BRCA2 interaksie met en moduleer die aktiwiteit van RAD51, 'n sentrale speler in homoloë rekombinasie, en Brca2 Dit is bekend dat mutante selle defekte in foutvrye rekombinasie het (Moynahan et al. 2001b Tutt et al. 2001). Daarom is die identifikasie van Brca2 as 'n FA geen ondersteun 'n rol vir die FA pad in rekombinasie DNA herstel. Hierdie hipotese word versterk deur die waarneming dat chromosome in die pachiteenstadium van meiose mispaar, soos hier beskryf. Een potensiële funksie vir die FA-weg kan wees om die interaksie tussen Rad51 en Brca2 te beheer en daardeur homoloë rekombinasiegebeurtenisse by plekke van DNA-skade te moduleer. Western klad ontleding van egter Fancd2 mutante weefsels het normale Rad51 vlakke getoon asook normale interaksie van die Brca2 en Rad51 proteïene soos bepaal deur ko-immunopresipitasie. Verder was Rad51 foci vorming na DNA-skade normaal in Fancd2 –/– MEF's. Ons data ondersteun dus nie 'n eenvoudige model waarin die FA-pad die stabiliteit/tempo van Brca2/Rad51-interaksie beheer nie.

In mense, heterosigositeit vir inaktivering BRCA2 kiemlynmutasies word geassosieer met bors-, eierstok- en pankreaskanker, almal gewasse van epiteeloorsprong. Dit is tans onduidelik waarom hierdie weefsels veral aangetas word, maar dit is interessant om daarop te let dat epiteelgewasse in knaagdiere geassosieer is met telomere-verkorting (Artandi et al. 2000 Chang et al. 2001). Dit is bekend dat menslike FA-pasiënte aansienlik verkorte telomere in hematopoietiese selle vertoon (Leteurtre et al. 1999 Adelfalk et al. 2001 Brummendorf et al. 2001 Hanson et al. 2001), en dit is dus interessant om te spekuleer dat die FA/BRCA-weg kan betrokke wees by telomere instandhouding in sommige weefsels.

Die hoë voorkoms van epiteelgewasse waargeneem in Fancd2 mutante stel hier ook die kwessie of FANCD2 kan 'n belangrike geen wees in sommige menslike epiteelkanker, veral van die bors en eierstok. Wat belangrik is, is dat sommige gevalle van familie eierstokkanker presies gekoppel is aan die streek waar FANCD2 woon in die menslike genoom (Sekine et al. 2001 Simsir et al. 2001 Zhang en Xu 2002). Toekomstige studies van menslike pasiënte met hierdie afwykings sal nodig wees om te bepaal of FA-gene 'n rol speel in sporadiese of oorgeërfde menslike kankers.


16.5: Mikroverslag 4- Aanvullingsanalise - Biologie

1) Beskrywing: Die genetiese manipulasie van gekweekte soogdierselle verteenwoordig 'n belangrike moderne eksperimentele benadering tot vrae oor seldifferensiasie, geenregulering en selstruktuur en -funksie sowel as bona fide genetiese prosesse soos mutasie en rekombinasie. Verreweg die algemeenste sulke genetiese manipulasie is die transfeksie van soogdierselle met gekloonde gene. Die krag van hierdie prosedure het byna elke laboratorium wat met gekweekte soogdierselle werk in 'n soogdierselgenetika-laboratorium verander, en geen kursus kon sulke eksperimente op enige eenvormige manier hanteer nie. Hierdie kursus sal 'n mate van oorweging van die transfeksieproses op sigself insluit, sowel as transfektasies wat inherent is aan mees onlangse werk. Daar sal egter ook klem gelê word op drie ander afsonderlike genetiese manipulasies: (1) mutasie en die isolasie en ontginning van mutante (2) genoom-jukstaposisie deur gebruik te maak van heterokaryons en basters wat deur selfusie gevorm word en (3) homoloë rekombinasie. Hierdie manipulasies verteenwoordig meestal genetiese instrumente eerder as prosesse wat in eie reg ondersoek word, en hulle sal meestal in daardie sin bespreek word. Gevolglik sal die lesings diverse biologiese vrae as onderwerpe van hierdie benaderings insluit. Die lesings en lesings is ontwerp om 'n konseptuele en historiese agtergrond vir hierdie benaderings en 'n steekproef van huidige werk van hierdie tipe te verskaf. As die tyd dit toelaat, sal ons sommige van die molekulêre biologiese metodes wat in hierdie studies gebruik word, ondersoek.

2) Formaat: Die weeklikse 2-2,5 uur byeenkomste (Donderdae 2 - 4 of 4:30 in Kamer 800) sal beide lesings en studenteaanbiedings van referate in die klassieke en huidige literatuur insluit. Na die eerste paar byeenkomste, wat meestal lesings sal wees, sal daar 'n bespreking van die week se leeswerk wees. Studente sal lukraak gevra word om kommentaar te lewer op een van die lesings of om 'n kort opsomming aan te bied. Die opmerking kan 'n gedetailleerde vraag, 'n kritiek of kwalifikasie van 'n gevolgtrekking wees, of oor 'n bevinding wat besonder interessant of belangrik was. Daar sal ook 'n voorafbepaalde aanbieding van 'n referaat in detail wees (sien hieronder). Na die bespreking en studenteaanbieding sal daar 'n lesing (

30 minute) wat 'n oorsig/agtergrond bied vir die leeswerk wat vir die komende week opgedra is.

3) Studente aanbiedings: Elke student sal verantwoordelik wees vir 1 tot 2

dertig minute aanbiedings van referate gedurende die semester. Sommige agtergrondleeswerk sal nodig wees om 'n goeie aanbieding te maak. Studente kan hul eie keuse vir 'n vraestel vervang eerder as die een wat vir 'n sessie gelys is, met die goedkeuring (ruim vooraf) deur die instrukteur. Studente kan in spanne werk vir hierdie aanbiedings as hulle wil hê dat 'n spanaanbieding tel as die helfte van 'n aanbieding vir elke spanlid.

4) Eksamens en gradering: Daar sal 'n kort vraestel as 'n middeltermyn-opdrag wees. Die onderwerp is die voorstel van 'n eksperiment gebaseer op die onderwerpe wat tot op daardie stadium gedek is. Die voorstel kan 'n uitbreiding wees van die werk wat in die gelese vraestelle beskryf word. Die vraestelle moet per e-pos gestuur word en sal op die kursuswebwerf gepubliseer word vir moontlike bespreking later in die kursus, indien die tyd dit toelaat. Daar sal 'n geskrewe finale tuis-eksamen wees wat ontwerp is om in een uur beantwoord te word. Grade sal gebaseer word op aanbiedings (25%), middeltermynvraestel (20%), eindeksamen (25%) en die vermoë om 'n sinvolle kommentaar/vraag oor die leeswerk te lewer (30%, gebaseer op proporsie suksesvolle kommentaar (op 'n alles-of-geen-basis: 0 of 1) per navraag Die laaste parameter is natuurlik ontwerp om tydige lees en klasdeelname te bevorder.

5) Voorbereiding: Hierdie kursus is bedoel vir nagraadse studente in biologie, maar is oop vir voorgraadse of nagraadse studente wat 'n kennis van biochemie, genetika en molekulêre biologie op die intermediêre voorgraadse vlak en 'n mate van vertroudheid met selbiologie het. Alle leeswerk sal uit die wetenskaplike literatuur wees.

6) Bylae van lesing en besprekingsonderwerpe (onderhewig aan verandering)

Sessie DatumLesing onderwerp
1 1/20 Sellyne. Mutasie. Spontane mutasietempo's. Die probleem van diploïdie. Mutagenese.
2 1/27 Sellyne. Mutasie. Mutagenese. Die probleem van diploïdie. Geen studenteaanbieding nie. Seleksie van mutante. Ontginbare metaboliese weë. Dwelmweerstand. FACS. Teenliggaampies.
3 2/3 Seleksie van mutante. Selsamesmelting. Heterokaryons.
4 2/10 Selsamesmelting. Heterokaryons. Hibriede selle: Komplementering. Dominansie/ resessiewiteit. Uitwissing van gedifferensieerde fenotipes
5 2/17 Hibriede selle: Uitsterwing van gedifferensieerde fenotipes Transfeksie. Mede-oordrag. Kloning van getransfekteerde gene.
6 2/24 Transfeksie. Kloning van getransfekteerde gene. Rekombinasie. Geen teiken, uitklophou, vervanging. Geenposisie-effekte. Geengrenselemente.
7 3/2 Gene teiken. Gene uitklophou. Geen vervanging. Geenposisie-effekte. Genetiese onstabiliteit. Kanker sel genetika. Tumoronderdrukker gene. Genetiese onstabiliteit.
8 3/9 Kanker sel genetika. Tumoronderdrukker gene. Genetiese onstabiliteit. Geenamplifikasie. Ko-amplifikasie van getransfekteerde gene. Geen opdrag nie, maar 'n middeltermynvraestel moet by die volgende vergadering ingedien word.
3/16 Lente vakansie Lente vakansie
9 3/23 Metodes bespreking en inhaal. Meer genetiese onstabiliteit. Mutante selle: seintransduksie mutante pre-mRNA splitsing mutante mutante van cholesterol metabolisme
10 3/30 Mutante selle Geen-identifikasie deur transfeksie: snellers van spierseldifferensiasie - (1) MyoD (2) 3' UTR's
11 4/6 Geen-identifikasie deur transfeksie: snellers van spierdifferensiasie - (1) MyoD (2) 3' UTR's Transfeksie-bemiddelde fenotipiese blokkering
12 4/13 Transfeksie-bemiddelde fenotipiese blokkering Isolasie van mutante molekules deur SELEX.
13 4/20 Isolasie van mutante molekules deur SELEX. DNA-skuifel. Mutante karakterisering deur mikroskikkings?
14 4/27 DNA-skuifel. Mutante karakterisering deur mikroskikkings?

Biol. G4054y Week 1 20 Januarie 2000 Sessie 1

Soogdiersellyne
Die probleem van diploïdie en heteroploïdie
Meting van spontane mutasietempo's. Koers teenoor frekwensie. Fluktuasie analise.
Mutagenese. Chemiese en fisiese middels. Dosis. Uitdrukking tydperk. Metaboliese samewerking.
Dominante vs. resessiewe mutasies
Mutagene spesifisiteit. Mutasie spektra. Strand spesifisiteit.

Leeswerk wat volgende keer bespreek sal word:

1. Die meeste lokusse is diploïed selfs in CHO-selle
Siciliano, M.J., J. Siciliano, en R.M. Humphrey. 1978. Elektroforetiese skuifmutante in Chinese hamster-ovariumselle: Bewyse vir genetiese diploïdie. Proc. Natl.Acad.Sci. VSA 75: 1919-1923.

2. Die twee DNA-stringe is differensieel vatbaar vir mutagenese
Carothers, A.M., J. Mucha en D. Grunberger. 1991. DNA-string-spesifieke mutasies geïnduseer deur (")-3a,4a-dihidroksi-1a,2a-epoksie-1,2,3,4-tetrahidrobenso[c]fenantreen in die dihidrofolaatreduktase geen Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 5749-5753

3. Mutasies vind lukraak plaas, en hoe om die spontane tempo van mutasie te meet.
Luria, S.E. en M. Delbrück. 1943. Mutasies van bakterieë van virussensitiwiteit vir virusweerstand. Genetika 8:491-511. Herdruk in "Papers on Bacterial Genetics", E. Adelberg, ed. Little Brown, Boston, 1960.pp. 3-24. Sien alternatiewelik 'n korter beskrywing in G. Stent, "Molecular Genetics," Freeman, San Francisco, 1971, pp. 148-157. Benewens die feit dat dit 'n werklik klassieke artikel in genetika is wat die ewekansige aard van mutasie toon, beskryf hierdie artikel die gebruik van fluktuasie-analise as 'n manier om spontane mutasietempo te meet, wat blykbaar nie maklik is om te doen nie. Jy hoef nie al die wiskunde te volg om te sien wat hier gedoen word nie, lees dit in elk geval deur.

4. 'n Biochemiese basis vir die onsterflikheid van gekweekte sellyne.
A. G. Bodnar, M. Ouellette, M. Frolkis, S. E. Holt, C. Chiu, G. B. Morin, C. B. Harley, J. W. Shay, S. Lichtsteiner, W. E. 16 Januarie 1998. Science 279: 349-352. Verlenging van lewensduur deur die bekendstelling van telomerase in normale menslike selle. http://www.sciencemag.org/feature/data/telomerase/telomerase.shl

Onstabiele allele
Adair, G.M., R.S. Nairn, K.A. Brotherman, en M.J. Siciliano. 1989. Spontane CHO APRT heterosigote weerspieël hoëfrekwensie, alleel-spesifieke, delesie van die chromosoom Z4 APRT geen. Somat. Sel Molec. Genet. 15: 535-544

Verlies aan heterosigositeit deur chromosoomverlies
Li-C-Y. Yandell-D-W. Klein-J-B. 1992 . Molekulêre meganismes van spontane en geïnduseerde verlies van heterosigositeit in menslike selle in vitro. Somat-Sel-Mol-Genet. 18:77-87.

Veelvuldige mutasies mag nie onafhanklik voorkom nie
Li-C-Y. Yandell-D-W. Klein-J-B. 1992. Bewyse vir samevallende mutasies in menslike limfoblaste klone geselekteer vir funksionele verlies van 'n timidienkinase geen. Mol. Karsinogenese. 5: 270-7. (by P&S-biblioteek)

'n Sub-populasie van mutagene-behandelde selle gaan voort om teen 'n hoë frekwensie vir baie generasies te muteer
Little JB, Nagasawa H, Pfenning T, Vetrovs H. Radiat Res 1997 Oct148(4):299-307. Bestraling-geïnduseerde genomiese onstabiliteit: vertraagde mutageniese en sitogenetiese effekte van X-strale en alfa-deeltjies.

Hanteer die ploïdieprobleem vir die isolering van resessiewe mutante: brute kragseleksie van die dubbelmutante
Chasin, L.A., 1974. Mutasies wat adenienfosforibosieltransferase-aktiwiteit in Chinese hamsterselle beïnvloed. Sel 2: 37-41

Ploïdie kan 'n probleem wees vir die isolering van resessiewe mutante belangrikheid van seldigtheid en uitdrukkingstyd.
Chasin, L.A., 1973. Die effek van ploïdie op chemiese mutagenese in gekweekte Chinese hamsterselle. J. Sel. Fisiol. 82: 299-308

Watter soorte DNA-veranderinge vind spontaan in soogdierselle plaas?
Zhang, L-H., H. Vrieling, A. A. van Zeeland en D. Jenssen. 1992. Spektrum van spontaan voorkomende mutasies in die hprt-geen van V79 Chinese hamsterselle. J. Mol. Biol. 223:627-635.

Mutante wat in die mitochondriale genoom geraak word, kan ook geselekteer word.
Hofhaus, G. en G. Attardi. 1995. Doeltreffende seleksie en karakterisering van menslike sellyne wat gebrekkig is in mitochondriale DNA-gekodeerde subeenhede van NADH dehidrogenase. Mol. Sel. Biol. 15:964-974 (regstelling 15:3461)

G4054y Week 2 27 Januarie 2000 Sessie 2

Lesing: Seleksie van mutante

Ontginbare metaboliese weë: purien- en pirimidienbiosintese. Aminosuur biosintese.
Geneesmiddelweerstand: 6-tioguanien (TG), 5-bromodeoksienridien (BrdU, BUdR), ouabain
FACS (fluoressensie-geaktiveerde sel sorteerder)
Teenliggaampies. Lysis met komplement. Auxotrofe. Temperatuur-sensitiewe mutante: tritium selfmoord.
Sib seleksie, replika platering
Seleksie van revertante
Uitdrukking tydperk
Seldigtheid-effekte: kruisvoeding, metaboliese samewerking.

Leeswerk wat volgende keer bespreek sal word:

1. Auxotrophs via BrdU selfmoord
Kao FT, Puck TT. Proc Natl Acad Sci U S A 1968 60: 1275-81. Genetika van somatiese soogdierselle, VII. Induksie en isolasie van voedingsmutante in Chinese hamsterselle.

2.Die mutasie-aanduidende vlek maak die mutant dood, wat geïsoleer kan word deur "sib seleksie"
Rosenstraus M, Chasin LA. Proc Natl Acad Sci U S A 1975 72: 493-7. Isolasie van soogdierselmutante wat 'n tekort aan glukose-6-fosfaatdehidrogenase-aktiwiteit het: koppeling aan hipoksantienfosforibosieltransferase.

3. Identifikasie van mutante deur opsporing van afgeskeide produk (versuim om af te skei).
Coffino P, Scharff MD. Proc Natl Acad Sci U S A 1971 J 68: 219-23 Tempo van somatiese mutasie in immunoglobulienproduksie deur muismiëloomselle.

4. Tour de force van verskeie moderne tegnieke (baie nog nie gedek nie, maar doen die beste wat jy kan).
Rice GC, Goeddel DV, Cachianes G, Woronicz J, Chen EY, Williams SR, Leung DW. Proc Natl Acad Sci U S A 1992 89: 5467-71. Ewekansige PCR-mutagenese sifting van afgeskeide proteïene deur direkte uitdrukking in soogdierselle.

Dwelmweerstand, met fyn manipulasie van dosis
Jones, GE en Sargent, PA. 1974. Sel 2: 43-54. Mutante van gekweekte Chinese hamsterselle met 'n tekort aan adenienfosforibosieltransferase.

Seleksie vir genotipe in plaas van fenotipe.
Khrapko K, Coller H, Andre P, Li XC, Foret F, Belenky A, Karger BL, Thilly WG Nucleic Acids Res 1997 25: 685-693 Mutasiespektrometrie sonder fenotipiese seleksie: menslike mitochondriale DNA.

Replika-platering van soogdierselle.
Stamato TD, Jones C Somatic Cell Genet 1977 3: 639-47. Isolasie van 'n melksuurdehidrogenase-A-tekort CHO-K1 mutant deur nylon lap replika plating.

Meer gevorderde mutante seleksie wat koloniesifting behels
Nagan N, Hajra AK, Das AK, Moser HW, Moser A. 'n nuwe defek in plasmalogeen biosintese.

Meer fyner dwelm-weerstand keuse
Nohturfft A, Hua X, Brown MS, Goldstein JL Proc Natl Acad Sci USA 1996 Nov 2693(24):13709-13714. Herhalende G-na-A-vervanging in 'n enkele kodon van SREBP-splyting-aktiverende proteïen veroorsaak sterolweerstand in drie mutante Chinese hamster-ovariumsellyne.

Biol. G4054y Week 3 3 Feb. 2000 Sessie 3

Lesing 3: Selsamesmelting - Heterokaryons.

Fusogeniese middels: PEG, Sendai-virus (sinsitia-bevorderend, as MIV).
Heterokaryons. Hibriede.
Sitoplaste (sitogalasien-enucleated selle), karioplaste, gerekonstrueerde selle, mitochondriale oorerwing [CAP R , valinomycin R ])
Mikroselle (via kolcemied-geïnduseerde mikronuklei + sitochalasien) en samesmelting. Sien hieronder vir kartering)

Edidin: beweeglikheid van plasmamembraanproteïene

Komplementering (bv. X. pigmentosum ongeskeduleerde DNA-sin. [herstel])

Geenreguleringstudies: Selsiklusbeheer (Rao en Johnson):

G2 x S = verpulvering van S, G2 --> vertraag M geen DNA syn in G2 nuc.
G1 x S = S in beide. G1-chromosome is goeie substrate vir DNA-syn (moet nie wag nie)
G1 x G2 = G1 --> normaal S, G2 --> vertraagde M, G2 inhibeer nie DNA-sintese van G1

Heraktivering van piknotiese kerne (Henry Harris, hen ertirosiete x HeLa)
RBC=weglaatbare sitoplasmakern swel Hu nuc. Ag nukleoli vergroot, syn RNA kuiken produkte=oppervlak Ag HPRT DNA sintese (H. Harris)

MIV virale samesmelting simulasie: CD4+ muis sel + GP120/GP41+ CHO sel. Toets terapeutiese reagense (bv. sCD4-mededingerproteïene)

Aktivering van gespesialiseerde gene (spiergene in nie-spierselle - voorskou) (vraestel sal volgende keer bespreek word)

Verbygaande samesmelting vir biochemiese analise (FB x GH3 -> PRL-CAT in fibroblaste) (vraestel sal volgende keer bespreek word)

Leeswerk wat volgende keer bespreek word: 1. Skakel gespesialiseerde gene in heterokaryons aan
Blau, H., C.-P. Chiu en C. Webster. 1983. Sitoplasmiese aktivering van menslike kerngene in stabiele heterokaryons. Sel 32: 1171-1180.

2. Gebruik heterokaryons om te bewys dat sommige hnRNP's uit en dan terug in die kern beweeg
Pinol-Roma S, en G. Dreyfuss. 1992. Verskuiwing van pre-mRNA bindende proteïene tussen kern en sitoplasma. Nature 355:730-2

3. 'n Verbygaande samesmeltingseksperiment om die teenwoordigheid van gespesialiseerde geenaktiveerders in pituïtêre selle aan te toon
Lufkin, T. en Bancroft, C. 1987. Identifikasie deur selsamesmelting van geenvolgordes wat met positiewe trans-werkende faktore in wisselwerking tree. Science 237: 283-286 Bykomende voorstelle:

Gebruik van heterokaryons om komplementanalise tussen DNA-herstelmutante te doen
Kraemer et al. 1975. Genetiese heterogeniteit in Xeroderma pigmentosum: komplementeringsgroepe en hul verhouding tot DNA-hersteltempo. P.N.A.S. 72: 59-63

Selsiklusbeheer in heterokaryone wat tussen selle in verskillende stadiums van die selsiklus gevorm word
Rao, P. en R.T. Johnson 1970. Soogdierselsamesmelting: I. Studies oor die regulering van DNA-sintese en mitose. Nature 225: 159-164

Transaktivering van dormante gene deur blootstelling aan 'n ander sitoplasma in heterokaryons
Harris, H. 1965. Gedrag van gedifferensieerde kerne in heterokaryons van dierselle van verskillende spesies. Nature 206: 583-588.

Die vloeibaarheid van die selmembraan word gedemonstreer aangesien heterokaryone deur selfusie gevorm word
Frye, L.D., en M. Edidin. 1970. Die vinnige vermenging van seloppervlak antigene na vorming van muis-mens heterokaryons.

Die mees uitgebreide gebruik van heterokaryons om die determinante van seldifferensiasie te ondersoek
Blau, H. 1985. Oorsig van haar werk oor myoblast heterokaryons. Science 230: 758

Gebruik van heterokaryons om die teenwoordigheid van spierspesifieke positiewe regulatoriese faktore te openbaar
Miller, S.C., G.K. Pavlath, B.T. Blakely, en H.M. Blau. 1988. Spierselkomponente dikteer hepatosiet-geenuitdrukking en die verspreiding van die Golgi-apparaat in heterokaryons. Gene en Dev. 2: 330-340.

Begin van uitsterwing kort na selfusie
Junker S, Lamm M, Nielsen V, Matthias P. J Cell Sci 1997 Oct110 (Pt 20):2579-2587 Uitwissing van immunoglobulien-geenuitdrukking in B-selle na samesmelting met HeLa-selle word voorafgegaan deur vinnige kernuitputting van noodsaaklike transkripsiefaktore en is vergesel van wydverspreide inaktivering van gene wat op 'n B-sel-spesifieke wyse uitgedruk word.

(Biol G4054 Leeslys 2: Week 4 en 5: 10 en 17 Feb. 2000)

Biol. G4054y Week 4: 10 Februarie 2000

Lesing: Selsamesmelting - selbasters
Seleksie van ware hibriedeselle (kernfusie)
Vir: kartering aanvulling analise dom./reses. en gedifferensieerde geenbeheer.
HAT seleksie (TK - x HPRT - ) Universele verbasteraar (bv. oua R HPRT - x WT) eksog. gene: neoR=G418R
Frekwensies: heterokaryons = 10%, basters = 0.1% (selsiklus? sinchronisasie help)
Seleksie sonder merkers (gifstowwe: risien x dipth. toksien joodasetamied x DEPC?)
Cybriede het selle gerekonstrueer
Assessering van dominansie vs. resessieiwiteit (bv. MTX R : permeat=reses, ander=dom :bv. slimmer ensieme, geamplifiseerde lokusse).
Komplementeringstoetse (gly [4] , ade [-9] auxotrophy)
Genetiese kartering
Intraspesifieke basters en vinnige chromosoomsegregasie
Konkordante segregasie. Volg via: chromosoombanding, chromosoomverf, isosime, PCR.
Muis-mens en hamster-mens permanente panele (verskillende menslike kombinasies).
(5 basters kan alle sintenie vertel: 5 bisse=32: 1-6 1-8,17-24 1-4,9-12,17-20 12, 56, ens vreemd)
Enkel menslike chromosoompanele mikrosel samesmelting
Sub-chromosomale kartering: natuurlike translokasies stralingsbasters (in lees vir volgende keer)
Uitwissing of aktivering van weefselspesifieke gene:
melanome en pigmentasie (Ephrussi, Davidson)
hepatomas: albumien, lewerensieme (Weiss). Onafhanklikheid (via segregasie) vs. programmaties (gededifferensieerde variante)
geen (kern) dosis en aktivering (Darlington)
wedersydse uitwissing (melanoom X hepatoom) (Weiss)
uitwissing = geenonderdrukking, aktiveerderonderdrukking, aktiveerderverdunning ??
De novo metilering
Karin voorbeeld: pituïtêre x FB = prolaktien: uitsterwing korreleer met 'n gebrek aan pit-1-aktiveerder (in lees):
Kartering van die brandblussers (Fournier [2 vraestelle])
Definieer cis-teiken vir uitwissing: Eckhardt-vraestel wat volgende keer bespreek word

Selhibridisasie: Meganismes van uitsterwing

Leeswerk wat volgende keer bespreek sal word:
1. Hoe om selbasters te selekteer
Littlefield, J. 1964. Seleksie van basters uit parings van fibroblaste in vitro en hul veronderstelde rekombinante. Wetenskap 145: 709-710.

2. 'n Voorbeeld van intra-chromosomale geenkartering deur gebruik te maak van selhibridisasie
Gyapay G, Schmitt K, Fizames C, Jones H, Vega-Czarny N, Spillett D, Muselet
D, Prud'Homme JF, Dib C, Auffray C, Morissette J, Weissenbach J, Goodfellow
PN (1996) 'n Bestraling hibriede kaart van die menslike genoom. Hum Mol Genet 1996 Mar5(3):339-46

3. Uitsterwing kan die regulering van transkripsiefaktoruitdrukking behels.
McCormick, A., D. Wu, J.L.Castrillo, S. Dana, J. Strobl, E.B. Thompson, en M. Karin. 1988. Uitwissing van groeihormoonuitdrukking in somatiese selbasters behels onderdrukking van die spesifieke trans-aktiveerder GHF-1.

4. Gebruik van kiesbare transgene om uitsterwing te toon wat klassieke versterkerelemente beïnvloed,
Yu, H., Porton, B., Shen, L.Y., en Eckhardt, L.A. 1989. Rol van die oktameermotief in hibriede sel-uitwissing van immunoglobulien-geenuitdrukking: uitsterwing is dominant in 'n twee-verbeterstelsel. Sel. 58: 441-8l 55: 379-389. Bykomende voorstelle:

Genoomwye kaartkonstruksie deur stralingsbasters te gebruik.
Stewart EA, et al. Genome Res 1997 Mei 7:5 422-33. 'n STS-gebaseerde bestraling hibriede kaart van die menslike genoom.

Gededifferensieerde variant hepatoom selle kan geïsoleer word, en hulle blus lewer-spesifieke gene
Deschatrette, J. en M.C. Weiss. 1975. Uitwissing van lewerspesifieke funksies in basters tussen gedifferensieerde en gededifferensieerde rothepatoomselle. Somatiese Sel Genet. 1: 279-292

Uitwissing kan 'n tweerigtingstraat wees
Fougere, C. en M.C. Weiss. 1978. Fenotipiese uitsluiting in muis melanoom-rat hepatoom basters selle: pigment en albumien produksie word nie gelyktydig heruitgedruk

Uitwissing van lewerspesifieke gene kan plaasvind deur 'n hoë vlak van proteïenkinase A-katalitiese aktiwiteit
Jones KW, Shapero MH, Chevrette M, Fournier RE. Sel 1991 Sep 666(5):861-872. Subtraktiewe hibridisasiekloning van 'n weefselspesifieke blusser: TSE1 kodeer 'n regulatoriese subeenheid van proteïenkinase A.
en
Boshart M, Weih F, Nichols M, Schutz G. Cell 1991 Sep 666(5):849-859 Die weefselspesifieke bluslokus TSE1 kodeer 'n regulatoriese subeenheid van cAMP-afhanklike proteïenkinase.

Uitwissing beïnvloed baie transkripsiefaktore.
Nitsch, D., M. Boshart en G. Schutz. 1993. Uitwissing van tirosienaminotransferase geenaktiwiteit in somatiese selbasters behels modifikasie en verlies van verskeie noodsaaklike transkripsionele aktiveerders. Gene & Ontwikkel. 7: 308-319

Uitwissing van lewerspesifieke transkripsiefaktore
Bulla GA. Nucleic Acids Res 1997 Jun 1525(12):2501-2508. Hepatosiet-kernfaktor-4 verhoed stilmaking van hepatosiet-kernfaktor-1-uitdrukking in hepatoom x fibroblastselbasters.

Uitwissing van lewerspesifieke gene bestudeer met 'n selekteerbare transgeen
Keherly MJ, Hsieh CC, McCombs JL, Merryman LS, Papaconstantinou, J., Somat Cell Mol Genet 1996. 22(2):119-134. Karakterisering van somatiese selbasters wat uitsterwing van AFP, albumien en 'n AFP-HPRT transgeen toon.

Biologie G4054y Week 5 17 Februarie 2000

Lesingonderwerp: Transfeksie en geenoordrag

CaPO4, Elektroporasie, Lipofeksie
Moet sitoplasma deurkruis. Baie verswelg in lisosome. Inhibisie van lisosomale funksie help dikwels (chloroquin)
Pechelosoom
2000 KB ko-integrasie (Robins)
Afsonderlike transfeksies -> aparte liggings
Ewekansige of semi-ewekansige (baie) integrasiewerwe (tensy geteiken)
Lae homoloë rekombinasie (voorspel tot volgende week se leeswerk)
Vgl. gis: 50% homoloë rec'n, 1/100ste die DNA. So as onwettige rekombinasie eweredig aan vals plekke, verwag 50%/100 = 0.5% homoloë in soogdierselle (

wat jy kry).
Verbygaande transfeksie vs. permanent: gekloonde gene -> 10-50% verbygaande (vlek)
Permanente meer soos 0,001 (per ?g DNA per sel). d.w.s. 106 -> 1000 kolonies
Een van die mees dramatiese eerste toepassings van geentransfeksie vanaf totale DNA: Oordrag van die groei-getransformeerde fenotipe: vermoë om te groei in multilae of in suspensie in sagte agar: (Weinberg, Wigler)
DNA van tumor getransfekteer in groeibeheerde muis 3T3 selle. Soek foci (fokus).
Maak 'n biblioteek van groei-getransformeerde transfektant.
Skerm vir menslike Alu-herhaling.
Verifieer dat gekloonde DNA 'n hoë frekwensie van fokusvormende transfektante lewer.
Isoleer cDNA deur hibridisasie.
Volgorde.
Identifiseer geen: = 'n dominante onkogeen. Ras, 'n seinproteïen (in transduserende pad vir die waarneming van groeifaktore).

En so nou: Voeg gene by, maak 'n sel. Maak 'n muis.

Leeswerk word volgende keer bespreek:

1. Eerste DNA-oordrag van 'n enkele gedefinieerde geen
Wigler, M., Silverstein, S., Lee, L.-S., Pellicer, A., Cheng, Y.-C., en Axel, R. 1977. Sel 11:223-232. Oordrag van gesuiwerde herpesvirus timidienkinase geen na gekweekte muisselle.

2. Eerste goed-gekarakteriseerde oordrag van 'n enkele gedefinieerde geen vanaf totale genomiese DNA
Wigler M. Pellicer A. Silverstein S. Axel R. 1978. Biochemiese oordrag van enkelkopie-eukariotiese gene deur gebruik te maak van totale sellulêre DNA as skenker. Sel. 14: 725-31.

3. Retrovirusse as vektore vir geenoordrag na soogdierselle.
Whitehead I, Kirk H, Kay R. Mol Cell Biol 1995 Feb15(2):704-710. Uitdrukkingkloning van onkogene deur retrovirale oordrag van cDNA-biblioteke.

4. 'n Meer komplekse seleksie om 'n geen te kloon deur seleksie vir funksie
Evans, C.J., D.E. Keith, Jr., H. Morrison, K. Mogandzo en R.H. Edwards. 1992. Kloning van 'n delta-opioïedreseptor deur funksionele uitdrukking. Science 258:1952-1955.

Bykomende voorstelle:

Verfyning en karakterisering van stabiele oordrag van 'n gedefinieerde geen in soogdierselle
Pellicer A. Wigler M. Axel R. Silverstein S. 1978. Die oordrag en stabiele integrasie van die HSV timidienkinase geen in muisselle Sel. 14:133-41.

Een van die eerste sellulêre gene wat deur seleksie vir funksie gekloon is
Lowy, I., A. Pellicer, J.F. Jackson, G-K. Sim, S. Silverstein en R. Axel. 1980. Isolasie van transformerende DNA: kloning van die hamster-aprt-geen. Sel 22: 817-823.

Adenovirus as 'n geenoordragvektor: Zhao H, Ivic L, Otaki JM, Hashimoto M, Mikoshiba K, Firestein S. Science 1998 Jan 9279(5348):237-24.Funksionele uitdrukking van 'n soogdierreukreseptor.

Biologie G4054y Week 6 24 Februarie 2000

Rekombinasie geen-teikening
Nie-homologe en homoloë rekombinasie
Mitotiese rekombinasie tussen homoloë chromosome
Verwantskap met kanker deur die verlies van tumoronderdrukkergene
(ontmasker deur rekombinasie wat lei tot verlies van heterosigositeit (LOH)(Cavanee)).
Rekombinasie van getransfekteerde gene: homoloë vs. nie-homologe rekombinasie.
Geenomskakeling vs. wederkerige rekombinasie.
Voorbeeld: Rekombinasie tussen tandem-insetsels (Liskay)
Geen uitkloppunte deur homoloë rekombinasie.
ES-selle en transgeniese muise.
Seleksie vir homoloë rekombinante deur verlies van virale TK-geen (Capecchi-vraestel sal volgende keer bespreek word)
Alleelvervangings in gekweekte sellyne. Voorbeeld: APRT geen vervanging (Adair)
Posisie-effekte. Grenselemente. SARs/MARs.

Leeswerk wat volgende keer bespreek sal word:
1. Seleksie teen nie-homologe rekombinante en dus vir geen-teikening.
Mansour SL, Thomas KR, en Capecchi MR.1988. Ontwrigting van die proto-onkogeen int2 in muis-embrio-afgeleide stamselle: 'n algemene strategie vir die teiken van mutasies na nie-selekteerbare gene. Nature 336:348-52

2. KO van 'n splitsingsgeen in 'n hoendersellyn wat hoë vlakke van homoloë rekombinasie toon
Wang J, Takagaki Y, Manley JL Genes Dev 1996 Okt 1510(20):2588-2599 Geteikende ontwrigting van 'n noodsaaklike gewerwelde geen: ASF/SF2 word vereis vir sellewensvatbaarheid.

3. Die vind van nuwe gene deur middel van invoegingsmutagenese
Friedrich G, Soriano P. Genes Dev. 1991 Sep5(9):1513-23. Promotor lokvalle in embrioniese stamselle: 'n genetiese skerm om ontwikkelingsgene in muise te identifiseer en te muteer.

4. Gemanipuleerde werfspesifieke integrasie.
Fukushige S, Sauer B. Proc Natl Acad Sci U S A 1992 Sep 189(17):7905-9 Genomiese teikening met 'n positiewe-seleksie lox-integrasievektor laat hoogs reproduceerbare geenuitdrukking in soogdierselle toe.

Invloed van plaaslike chromatienstruktuur op getransfekteerde gene en omgekeerd
Pikaart, M., Feng, J.A.U. en Villeponteau, B. 1992. Die poliomavirusversterker aktiveer chromatientoeganklikheid by integrasie in die HPRT-geen. Molekulêre & Sellulêre Biologie 12:5785-92

Effek van geenposisie op mutasie in 'n geïntegreerde transgeen
Lichtenauer-Kaligis, E.G., van der Velde-van Dijke, I.,den Dulk, H., van de Putte, P., Giphart-Gassler, M.,Tasseron-de Jong, J.G. 1993. Genomiese posisie beïnvloed spontane mutagenese van 'n geïntegreerde retrovirale vektor wat die hprt cDNA as teiken vir mutagenese bevat. Menslike Molekulêre Genetika 2:173-82

Lichtenauer-Kaligis EG, Thijssen J, den Dulk H, van de Putte P, Tasseron-de Jong JG, Giphart-Gassler M. Vergelyking van spontane hprt-mutasiespektra by die nukleotiedvolgordevlak in die endogene hprt-geen en vyf ander genomiese posisies. Mutat Res 1996 351:147-155.

Cis-werkende elemente wat posisie-onafhanklikheid bevorder
Talbot, D., Descombes, P., Schibler, U. 1994. Die 5' flankerende streek van die rot LAP (C/EBP beta) geen kan hoëvlak, posisie-onafhanklike, kopiegetal-afhanklike uitdrukking in veelvuldige weefsels rig. in transgeniese muise. Nukleïensure Navorsing 22:756-66

K.O. van Okt2 laat steeds Ig-geenuitdrukking toe, maar verminder die werking van kunsmatige versterkers. Feldhaus AL, Klug CA, Arvin KL, Singh H. EMBO J 1993 7:2763-72. Geteikende ontwrigting van die Oct-2 lokus in 'n B-sel verskaf genetiese bewyse vir twee afsonderlike seltipe-spesifieke weë van oktameer element-gemedieerde geenaktivering.

Biologie G4054y Week 7 2 Maart 2000

Kanker sel genetika
Onkogene en proto-onkogene
Dominante onkogene vs. tumor onderdrukker gene
Retinoblastoom (Knudson)
Selsiklusbeheer
Genetiese onstabiliteit en kanker vatbaarheid

Leeswerk sal volgende keer bespreek word

1. Classic oorspronklike molekulêre genetiese analise van tumor onderdrukkers
Cavenee, W.K. Dryja, T.P., Phillips, R.A., Benedict, W.F., Godbout, R., Gallie, B.L., Murphree, A.L., Strong, L.C., en White, R.L. 1983. Uitdrukking van resessiewe allele deur chromosomale meganismes in retinoblastoom. Natuur. 305: 779-84

2. Mutasies wat DNA-herstel beïnvloed, dra by tot kankergevoeligheid
Leach et al., 1993. Mutasies van 'n mutS homoloog in oorerflike nie-poliposis kolorektale kanker. Sel 75: 1215-1225.

3. Globale genomiese onstabiliteit in gewasse
Stoler DL, Chen N, Basik M, Kahlenberg MS, Rodriguez-Bigas MA, Petrelli NJ, Anderson GR Die aanvang en omvang van genomiese onstabiliteit in sporadiese kolorektale tumor progressie. Proc Natl Acad Sci U S A (1999) 96:15121-6

4. Tumormutasies en tumorevolusie
Cahill DP, Kinzler KW, Vogelstein B, Lengauer C. Tendense Cell Biol 1999 Des9(12):M57-60. Genetiese onstabiliteit en Darwinistiese seleksie in gewasse.

Seleksie van mutante wat weerstand bied teen p53-gemedieerde groei-inhibisie.
Jennifer A. Pietenpol, Christoph Lengauer, Jan Jordan, Kenneth W. Kinzler, Bert Vogelstein. Verrigtinge van die Nasionale Akademie van Wetenskappe. Volume 93: 8390-8394. Soogdierselle wat weerstand bied teen tumoronderdrukkergene.

Biochemiese basis van hersteltekort wat verband hou met kolonkanker
Parsons, R., Li, G.-M., Longely, MJ, Fang, W., Papadopoulos, N., Jen, J., de la Chapelle, A., Kinzler, KW, Vogelstein, B., en Modrich. , P. 1993. Hipermutabiliteit en wanpassing herstel tekort in RER + tumor selle. Sel 75: 1227-1236.

Geen genetiese onstabiliteit word geassosieer met polioom-geïnduseerde gewasse in muise nie (teen die neiging).
Jakubczak JL, Merlino G, French JE, Muller WJ, Paul B, Adhya S, Garges S. Proc Natl Acad Sci U S A 1996. 93(17):9073-9078. Ontleding van genetiese onstabiliteit tydens mamma tumor progressie deur gebruik te maak van 'n nuwe seleksie-gebaseerde toets vir in vivo mutasies in 'n bakteriofaag lambda transgeen teiken.

Ontleding van 'n kankergevoeligheid- en DNA-herstelgeen wat met 'n menslike siekte geassosieer word
Morgan SE, Lovly C, Pandita TK, Shiloh Y, Kastan. Mol Cell Biol 1997 Apr17:2020-2029 Fragmente van ATM (die ataxia-telangiectasia-geen) wat dominant-negatiewe of komplementerende aktiwiteit het.

Biologie G4054y Week 8 9 Maart 2000

Geen leesopdrag nie, vraestel wat 'n eksperiment voorstel moet volgende vergadering (23 Maart).

Jy sal dalk wil kyk na die vraestelle wat volgende keer aangebied word:

David Fields
Telomerase herbesoek
Hahn WC, Counter CM, Lundberg AS, Beijersbergen RL, Brooks MW, Weinberg
RA. Nature 1999 Jul 29400(6743):464-8. Skepping van menslike tumorselle met gedefinieerde genetiese elemente.

Dan Crossman
Immunoglobulien geen hipermutasie
Storb U, Klotz EL, Hackett Jr., Kage K, Bozek G, Martin TE 'n Hipermuteerbare insetsel in 'n immunoglobulientransgeen bevat brandpunte van somatiese mutasie en volgordes wat hoogs stabiele strukture in die RNA-transkripsie voorspel. J Exp Med 1998 Aug 17188(4):689-98

Geenamplifikasie (geen leeswerk oor hierdie onderwerp toegeken nie) (sien meer uitgebreide notas op die web)
Histories: Metotreksaatweerstand (Littlefield): Hoë dihidrofolaatreduktase (DHFR) ensiemaktiwiteit, proteïen, proteïensintetiese tempo, vertaalbare mRNA. (Schimke): mRNA-vlak, DNA-vlak.
Homogene kleuring, uitgebreide chromosomale streke (HSRs): Biedler
Nunberg: = dhfr gene.
Dubbel minuut chromosome.
Amplicons.
Modelle: oorreplikasie, ongelyke susterchromatied-uitruiling. Laasgenoemde word ondersteun.
Geenamplifikasie en genetiese onstabiliteit.
Tltsy: normale selle versterk nie p53-selle nie.
In die natuur: rDNA in oösiete, Drosophila chorion-gene.
In medisyne: chemoterapie weerstand kanker: N-src in neuroblastoom.
In biotegnologie: hoëvlak rekombinante proteïenproduksie in soogdierselle.

Lesings oor geenamplifikasie:

Sitogenetiese studie van veranderinge wat gepaard gaan met vroeë geenamplifikasiegebeure
Trask, B.J., en Hamlin, J.L. 1989. Vroeë dihidrofolaatreduktase-geenamplifikasiegebeure in CHO-selle vind gewoonlik op dieselfde chromosoomarm as die oorspronklike lokus plaas. Gene en ontwikkeling. 3: 1913-25 (agtergrond vir #2).
en
Ma, C., Martin, S., Trask, B., Hamlin, J.L. 1993. Susterchromatiedfusie inisieer amplifikasie van die dihidrofolaatreduktase-geen in Chinese hamsterselle. Gene & Development 7: 605-20.

Geenamplifikasie vind slegs in geneties onstabiele tumorselle plaas
Tlsty, T.D. 1990. Normale diploïede menslike en knaagdierselle het nie 'n waarneembare frekwensie van geenamplifikasie nie. Proc. Natl. Acad. Wetenskap. USA 87: 3132-6, 1990 (agtergrond vir #4).

Geenamplifikasie word deur p53 onderdruk
Livingstone, L.R., White, A., Sprouse, J., Livanos, E., Jacks, T., en Tlsty, T.D.1992. Veranderde selsiklus-stilstand en geenamplifikasiepotensiaal gaan gepaard met verlies van wilde-tipe p53. Sel 70: 923-35.

Klassieke vraestel wat middelweerstandigheid demonstreer kan deur geenamplifikasie veroorsaak word
Alt FW, Kellems RE, Bertino JR, Schimke RT J Biol Chem 1978: 253:1357-1370 Selektiewe vermenigvuldiging van dihidrofolaatreduktase-gene in metotreksaat-weerstandige variante van gekweekte murienselle.

Klassieke demonstrasie van ko-amplifikasie van getransfekteerde gene
Wigler, M., Perucho, M., Kurtz, D., Dana, S., Pellicer, A., Axel, R, Silverstein, S. Proc Natl Acad Sci USA 1980.77:3567-3570 Transformasie van soogdierselle met 'n versterkbare dominant-werkende geen.

Ko-amplifikasie van getransfekteerde gene vir hoëvlak rekombinante proteïenproduksie
Bladsy MJ, Sydenham MA. Biotechnology (1991) 9:64-68 Hoëvlak uitdrukking van die gehumaniseerde monoklonale teenliggaam Campath-1H in Chinese hamster-ovariumselle.

Biologie G4054y Week 9 23 Maart 2000. Isolasie van mutante selle: voorbeelde van interessante fenotipes

David Fields
Telomerase herbesoek
Hahn WC, Counter CM, Lundberg AS, Beijersbergen RL, Brooks MW, Weinberg
RA. Nature 1999 Jul 29400(6743):464-8. Skepping van menslike tumorselle met gedefinieerde genetiese elemente.

Dan Crossman
Immunoglobulien geen hipermutasie
Storb U, Klotz EL, Hackett Jr., Kage K, Bozek G, Martin TE 'n Hipermuteerbare insetsel in 'n immunoglobulientransgeen bevat brandpunte van somatiese mutasie en rye wat hoogs stabiele strukture in die RNA-transkripsie voorspel. J Exp Med 1998 Aug 17188(4):689-98

Lesing: voorbeelde van 'n paar interessante mutante

Reseptore: LDL, arielkoolwaterstofhidroksilase (weerstand teen polisikliese aromatiese koolwaterstowwe)
Seintransduksie: sikliese AMP (weerstand: Regulerende subeenheid Km, katalitiese subeenheid-negatiewe)
interferon (word volgende keer bespreek)
Regulering van biosintese: cholesterol (word volgende keer bespreek)
Transkripsieregulering: glukokortikoïedreseptor (deksametasoon-weerstandige limfoïede selle)
Organelbiogenese: peroksisome (pireen-alkoholbestand), mitochondria (Attardi)
Cis-werkende pre-mRNA-splytingsmutasies (sifting van natuurlike geen-negatiewe transgeen met moordenaar-ekson)

Leesstuk wat volgende keer bespreek word: 1. 'n Slim druk-trek dubbele seleksie vir mutante in die interferon-respons sein transduksie pad
Pellegrini, S. et al. 1989. Gebruik van 'n selekteerbare merker wat deur interferon gereguleer word om mutasies in die seinweg Mol. Sel. Biol. 9: 4605-4612. ( Wayne Devonish)

2. Metaboliese pad-mutante sluit die geaffekteerde n regulerende gene in
Rawson RB, Cheng D, Brown MS, Goldstein JL J Biol Chem 1998 273:28261-9. Isolasie van cholesterol-benodigde mutante Chinese hamster-ovariumselle met defekte in splitsing van sterol-regulerende element-bindende proteïene by plek 1.( Jinshi Shen)

3. Seleksie vir dihidrofolaatreduktase ensiem negatiewe mutante lewer baie splitsingsmutante
Carothers, A.M., G. Urlaub, D. Grunberger, en L.A. Chasin. 1993. Splitsing van mutante en hul tweede-plek onderdrukkers by die dihidrofolaat reduktase lokus in Chinese hamster eierstokselle. Mol. Sel. Biol. 13: 5085-5098.

4. Opstel van 'n gemanipuleerde geen om cis-werkende splitsingsmutasies te openbaar
Chen, I-T. en L.A. Chasin. 1993. Direkte seleksie vir mutasies wat spesifieke splitsingsplekke in 'n hamster-dihidrofolaatreduktase-minigen beïnvloed. Mol. Sel. Biol. 13: 289-300. Bykomende voorstel:

Karakterisering van mutante geselekteer in die interferon-respons sein transduksie pad
Leung, S.A., Qureshi, S.A., Kerr, I.M., Darnell, J.E. Jr., Stark, G.R. 1995. Rol van STAT2 in die alfa interferon seinpad. Molekulêre & Sellulêre Biologie 15:1312-7

Seleksie vir hprt-ensiem negatiewe mutante lewer baie splitsingsmutante op
Steingrimsdottir, H., G. Rowley, G. Dorado, J. Cole en A.R. Lehmann. 1992. Mutasies wat splitsing in die menslike hipoksantien-guanien-fosforibosieltransferase-geen verander. Nukleïensure Res. 20: 1201-1208.

Isolasie en karakterisering van mutante wat gebrekkig is in peroksisoomvorming
Tateishi K, Okumoto K, Shimozawa N, Tsukamoto T, Osumi T, Suzuki Y, Kondo ,N, Okano I, Fujiki. Nuut geïdentifiseerde Chinese hamster-ovariumselmutante wat gebrekkig is in peroksisoombiogenese verteenwoordig twee nuwe komplementeringsgroepe in soogdiere. Eur J Cell Biol 1997 Aug 73:4 352-9

Isolasie en karakterisering van cholesterolmetabolismemutante: een van verskeie tipes
Jacobs NL, Andemariam B, Underwood KW, Panchalingam K, Sternberg D, Kielian M, Liscum L. J Lipid Res 1997 Oct38(10):1973-1987 Analise van 'n Chinese hamster-ovariumselmutant met gebrekkige mobilisering van cholesterol vanaf die plasmamembraan na die endoplasmiese retikulum.

TGF-beta-wegmutante geïsoleer op 'n wyse soortgelyk aan die interferon-wegmutante hierbo.
Hocevar BA, Howe PH. Proc Natl Acad Sci U S A 1996 Jul 2393(15):7655-7660. Isolasie en karakterisering van mutante sellyne wat gebrekkig is in die transformasie van groeifaktor beta-sein.

Hersiening van die JAK/STAT-weg wat deur die interferon-respons mutante hierbo ondersoek is.
Briscoe J, Guschin D, Rogers NC, Watling D, Muller M, Horn F, Heinrich P, Stark GR, Kerr I. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 1996 Feb 29351(1336):167-171. JAKs, STATs en seintransduksie in reaksie op die interferone en ander sitokiene.

Biologie G4054y. Week 10. 30 Maart 2000

Isolasie van interessante selmutante wat geraak word in transkripsionele regulering of seintransduksie:

Wayne Devonish
10A. Pellegrini S, John J, Shearer M, Kerr IM, Stark GR, Mol Cell Biol 1989. 9: 4605-4612. Gebruik van 'n selekteerbare merker wat deur alfa-interferon gereguleer word om mutasies in die seinweg te verkry.

Jinshi Shen
10B. Rawson RB, Cheng D, Brown MS, Goldstein JL J Biol Chem 1998 273:28261-9. Isolasie van cholesterol-benodigde mutante Chinese hamster-ovariumselle met defekte in die splitsing van sterol-regulerende element-bindende proteïene by plek 1.

Leeswerk wat volgende keer bespreek sal word:

Gene-identifikasie deur transfeksie: snellers van spierseldifferensiasie

1. Identifikasie van die myoD geen deur transfeksie-geïnduseerde fenotipiese verandering
Davis RL. Weintraub H. Lassar AB. 1987. Uitdrukking van 'n enkele getransfekteerde cDNA verander fibroblaste na mioblaste. Sel 51: 987-1000.

2. Soogdiersel genetiese karakterisering van deregulering van differensiasie in spiertumorselle
Fiddler TA, Smith L, Tapscott SJ, Thayer MJ. 1996. Amplifikasie van MDM2 inhibeer MyoD-gemedieerde miogenese. Mol Cell Biol 16:5048-57

3. S verkiesing vir faktore wat miogene differensiasie in transfektante kan veroorsaak, lewer 'n verrassing
Rastinejad, F. en H.M. Blau. 1993. Genetiese aanvulling openbaar 'n nuwe regulerende rol vir 3'-onvertaalde streke in groei en differensiasie. Sel. 72:903-917.

Bykomende voorstelle:
Opvolg na 3' UTR regulatoriese RNA-vraestel hierbo deur dieselfde eerste outeur
Rastinejad F, Conboy MJ, Rando TA, Blau HM. 1993. Tumoronderdrukking deur RNA van die 3'-onvertaalde streek van alfa-tropomiosien. Sel 75:1107-1117

Ondersoek uitsterwing van myoD-aksie
Thayer MJ. Weintraub H. 1990. Aktivering en onderdrukking van miogenese in somatiese selbasters: bewyse vir trans-negatiewe regulering van MyoD in primêre fibroblaste. Sel 63:23-32

Biologie G4054y. Week 11. 6 April 2000

Gene-identifikasie deur transfeksie

Aanbiedings en bespreking:

1. Identifikasie van die myoD geen deur transfeksie-geïnduseerde fenotipiese verandering
Davis RL. Weintraub H. Lassar AB. 1987. Uitdrukking van 'n enkele getransfekteerde cDNA verander fibroblaste na mioblaste. Sel 51: 987-1000.

2. Soogdiersel genetiese karakterisering van deregulering van differensiasie in spiertumorselle
Fiddler TA, Smith L, Tapscott SJ, Thayer MJ. 1996. Amplifikasie van MDM2 inhibeer MyoD-gemedieerde miogenese. Mol Cell Biol 16:5048-57

3. S verkiesing vir faktore wat miogene differensiasie in transfektante kan veroorsaak, lewer 'n verrassing
Rastinejad, F. en H.M. Blau. 1993. Genetiese aanvulling openbaar 'n nuwe regulerende rol vir 3'-onvertaalde streke in groei en differensiasie. Sel. 72:903-917.

Transfeksie-bemiddelde fenotipiese blokkering (seleksie van genetiese onderdrukker elemente)

Antisense cDNA's + seleksie vir inhibisie van 'n biologiese pad (Roninson)
Afgekapte sin-cDNA's word op dieselfde manier gebruik.
Ook: Kimchi: weerstand teen interferon Strand: gis

Lees vir bespreking volgende keer: 1. Baie bevredigende demonstrasie van die uitvoerbaarheid van die stelsel deur lambda-gene en E. coli te gebruik.
Holzmayer, T.A., Pestov, D.G., Roninson, I.B. 1992. Isolasie van dominante negatiewe mutante en inhiberende antisense RNA-volgordes deur uitdrukkingseleksie van ewekansige DNA-fragmente. Nukleïensure Navorsing 20:711-7

2. Algemene genetiese onderdrukkerstrategie met voorbeelde uit gis.
Hannon GJ, Sun P, Carnero A, Xie LY, Maestro R, Conklin DS, Beach D. 1999. MaRX: 'n benadering tot genetika in soogdierselle. Wetenskap. 1999 Feb 19283(5405):1129-30.

3. Verskillende p53-gebaseerde genetiese onderdrukker elemente blokkeer verskillende p53 funksies.
Valeria S. Ossovskaya, Ilya A. Mazo, Michail V. Chernov, Olga B. Chernova, Zaklina Strezoska, Roman Kondratov, George R. Stark, Peter M. Chumakov, Andrei V. Gudkov. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 93:10309-10314. Gebruik van genetiese onderdrukkerelemente om duidelike biologiese effekte van afsonderlike p53-domeine te dissekteer. (Kristi McKinney)

4. Geenamplifikasie word deur p53 onderdruk
Livingstone, L.R., White, A., Sprouse, J., Livanos, E., Jacks, T., en Tlsty, T.D.1992. Veranderde selsiklus-stilstand en geenamplifikasiepotensiaal gaan gepaard met verlies van wilde-tipe p53. Sel 70: 923-35.
( Wayne Devonish)

Toepassing op soogdierselle
Gudkov, A.V., Kazarov, A.R., Thimmapaya, R., Axenovich, S.A., Mazo, I.A., en Roninson, I.B. 1994. Kloning van soogdiergene deur uitdrukkingseleksie van genetiese onderdrukkerelemente: assosiasie van kinesien met geneesmiddelweerstand en selverewiging. Proc. Natl. Acad. Wetenskap. VSA 91:3744-8

Blokkering van p53 deur genetiese onderdrukker elemente tesame met seleksie vir geneesmiddelweerstand
Gallagher WM, Cairney M, Schott B, Roninson IB, Brown R. Oncogene 1997 Jan 1614(2):185-193. Identifikasie van p53 genetiese onderdrukker elemente wat weerstand teen sisplatien verleen

Seleksie van antisense cDNA-fragmente wat weerstand teen interferon-gemedieerde groei-inhibisie verleen
Deiss LP, Kimchi A. Wetenskap 1991 Apr 5252(5002):117-120. 'n Genetiese hulpmiddel wat gebruik word om tioredoksien as 'n bemiddelaar van 'n groei-inhiberende sein te identifiseer.
Opvolg van bogenoemde
Cohen O, Feinstein E, Kimchi A. EMBO J 1997 Mar 316(5):998-1008. DAP-kinase is 'n Ca2+/kalmodulien-afhanklike, sitoskeletaal-geassosieerde proteïenkinase, met seldood-induserende funksies wat afhanklik is van sy katalitiese aktiwiteit

Nog 'n toepassing op soogdierselle deur die Roninson-laboratorium
Gudkov, A.V., Zelnick, C.R., Kazarov, A.R., Thimmapaya, R., Suttle, D.P., Beck, W.T., en Roninson, I.B. 1993. Isolasie van genetiese onderdrukker elemente, wat weerstand teen topoisomerase II-interaktiewe sitotoksiese middels veroorsaak, van menslike topoisomerase II cDNA. Proc. Natl. Acad. Wetenskap. VSA 90:3231-5

Biologie G4054y. Week 12. 13 April 2000

Transfeksie-bemiddelde fenotipiese blokkering

Aanbiedings en besprekings:

1. Baie bevredigende demonstrasie van die uitvoerbaarheid van die stelsel deur lambda-gene en E. coli te gebruik.
Holzmayer, T.A., Pestov, D.G., Roninson, I.B. 1992. Isolasie van dominante negatiewe mutante en inhiberende antisense RNA-volgordes deur uitdrukkingseleksie van ewekansige DNA-fragmente. Nukleïensure Navorsing 20:711-7

2. Algemene genetiese onderdrukkerstrategie met voorbeelde uit gis.
Hannon GJ, Sun P, Carnero A, Xie LY, Maestro R, Conklin DS, Beach D. 1999. MaRX: 'n benadering tot genetika in soogdierselle. Wetenskap. 1999 Feb 19283(5405):1129-30.

3. Verskillende p53-gebaseerde genetiese onderdrukker elemente blokkeer verskillende p53 funksies.
Valeria S. Ossovskaya, Ilya A. Mazo, Michail V. Chernov, Olga B. Chernova, Zaklina Strezoska, Roman Kondratov, George R. Stark, Peter M. Chumakov, Andrei V. Gudkov. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 93:10309-10314. Gebruik van genetiese onderdrukkerelemente om duidelike biologiese effekte van afsonderlike p53-domeine te dissekteer. (Kristi McKinney)

4. Geenamplifikasie word deur p53 onderdruk
Livingstone, L.R., White, A., Sprouse, J., Livanos, E., Jacks, T., en Tlsty, T.D.1992. Veranderde selsiklus-stilstand en geenamplifikasiepotensiaal gaan gepaard met verlies van wilde-tipe p53. Sel 70: 923-35. (
Wayne Devonish)

SELEX: seleksie van nukleïensuurvolgorde-teikens

Volgorde ruimte
Seleksie vir proteïenligande
Seleksie vir klein molekules ligande
Seleksie vir ribosime
In vivo SELEX
Genomiese SELEX

Lees vir bespreking volgende keer:

1. Seleksie van RNA-volgordes wat die beste aan die MIV Rev-proteïen bind
Bartel DP, Zapp ML, Green MR, Szostak Cell 1991 Nov 167(3):529-536. MIV-1 Rev-regulering behels die herkenning van nie-Watson-Crick-basispare in virale RNA. (Igor Shuryak)

2. Seleksie van volgordes wat RNA-ligering kan kataliseer
Ekland EH, Szostak JW, Bartel DP. Science 1995 Jul 21269(5222):364-370 Struktureel komplekse en hoogs aktiewe RNA-ligases afgelei van ewekansige RNA-volgordes

3. In vivo SELEX vir die splitsing van versterkervolgordes
Coulter LR, Landree MA, Cooper TA. Mol Cell Biol 1997 Apr 17:4 2143-50 Identifikasie van 'n nuwe klas van eksoniese splyting versterkers deur in vivo seleksie.

Bykomende voorstelle
Genomiese SELEX idees
Singer BS, Shtatland T, Brown D, Gold L. Nucleic Acids Res 1997 Feb 1525(4):781-786. Biblioteke vir genomiese SELEX.
en
Gold L, Brown D, He Y, Shtatland T, Singer BS, Wu Y. Proc Natl Acad Sci U S A 1997 Jan 794(1):59-64. Van oligonukleotiedvorms tot genomiese SELEX: nuwe biologiese regulatoriese lusse.

Biologie G4054y. Week 13. 20 April 2000

Bespreking van referate wat verlede week gelees is:

1. Seleksie van RNA-volgordes wat die beste aan die MIV Rev-proteïen bind
Bartel DP, Zapp ML, Green MR, Szostak Cell 1991 Nov 167(3):529-536. MIV-1 Rev-regulering behels die herkenning van nie-Watson-Crick-basispare in virale RNA. (Igor Shuryak)

2. Seleksie van volgordes wat RNA-ligering kan kataliseer
Ekland EH, Szostak JW, Bartel DP. Science 1995 Jul 21269(5222):364-370 Struktureel komplekse en hoogs aktiewe RNA-ligases afgelei van ewekansige RNA-volgordes

3. In vivo SELEX vir die splitsing van versterkervolgordes
Coulter LR, Landree MA, Cooper TA. Mol Cell Biol 1997 Apr 17:4 2143-50 Identifikasie van 'n nuwe klas van eksoniese splyting versterkers deur in vivo seleksie.

4. Nie toegewys vir lees nie:
Rawson et al.: Kloning van die sterol-regulerende element-bindende proteïenplek 1-splitsingsensiem. (Jingshi Shen)

Nuwe rigtings in mutagenese en mutantanalise

Lees vir bespreking volgende keer:

1. DNS-skuifel
Crameri A, Raillard SA, Bermudez E, Stemmer WP Nature 1998 39:288-91 DNA-skommeling van 'n familie van gene van diverse spesies versnel gerigte evolusie. (Adam Meshel)

2. Karakterisering van mutante fenotipes deur DNA mikroskikking analise
Sudarsanam P, Iyer VR, Brown PO, Winston F. Proc Natl Acad Sci U S A 2000 Mar 2897(7):3364-3369. Heel-genoom uitdrukking analise van snf/swi mutante van Saccharomyces
cerevisiae. (David Fields)

3. Genetiese voetspoor.
Laurent LC, Olsen MN, Crowley RA, Savilahti H, Brown PO. Funksionele karakterisering van die menslike immuniteitsgebreksvirus tipe 1 genoom deur genetiese voetspoor. J Virol. 2000 Mar74(6):2760-9.

Bykomende verwante vraestelle:
Hoë-resolusie funksionele kartering van 'n gekloonde geen deur genetiese voetspoor.
Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Feb 1894(4):1304-9.

Smith V, Chou KN, Lashkari D, Botstein D, Brown PO. Funksionele analise van die gene van gis chromosoom V deur genetiese voetspoor.Wetenskap. 1996 Des 20274(5295):2069-74.

Smith V, Botstein D, Brown PO. Genetiese voetspoor: 'n genomiese strategie vir die bepaling van 'n geen se funksie gegewe sy volgorde. Proc Natl Acad Sci U S A. 1995 Jul 392(14):6479-83.

Goryshin IY, Miller JA, Kil YV, Lanzov VA, Reznikoff WS. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998 95(18):10716-21. Tn5/IS50 teikenherkenning.

Biologie G4054y. Week 14. 27 April 2000

Laaste klas, geen opdrag nie.

Bespreking van vraestelle wat laas opgedra is.

1. DNS-skuifel
Crameri A, Raillard SA, Bermudez E, Stemmer WP Nature 1998 39:288-91 DNA-skommeling van 'n familie van gene van diverse spesies versnel gerigte evolusie.- (Adam Meshel)

2. Karakterisering van mutante fenotipes deur DNA mikroskikking analise
Sudarsanam P, Iyer VR, Brown PO, Winston F. Proc Natl Acad Sci U S A 2000 Mar 2897(7):3364-3369. Heel-genoom uitdrukking analise van snf/swi mutante van Saccharomyces cerevisiae.

3. Genetiese voetspoor.
Laurent LC, Olsen MN, Crowley RA, Savilahti H, Brown PO. Funksionele karakterisering van die menslike immuniteitsgebreksvirus tipe 1 genoom deur genetiese voetspoor. J Virol. 2000 Mar74(6):2760-9.



Kommentaar:

  1. Mosegi

    Ek is jammer dat ek jou onderbreek, maar jy kon nie meer inligting gee nie.

  2. Stem

    Ek beveel aan om 'n webwerf te besoek waarop daar baie inligting oor hierdie vraag is.

  3. Mokasa

    Dit lyk vir my dat jy verkeerd is

  4. Gardashicage

    Dit gebeur dus. We will examine this question.

  5. Bentleah

    Op die skouers af! Straat tafeldoeke! Soveel beter!

  6. Samusida

    on the ends of the moon, without guilt, without wine, she alone o_0 struck en *

  7. Fulop

    die outoritêre boodskap :), vreemd genoeg ...



Skryf 'n boodskap