Inligting

Selkleurstof in rooi fluoressensiespektrum

Selkleurstof in rooi fluoressensiespektrum


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Daar is 'n paar selkleurstowwe beskikbaar om selle intrasellulêr/membraan te verstewig. Ek is bewus van ander kanale (CFSE PKH26). Maar ek wil selle vlek vir vloeisitometrie met 'n 'rooi' kleurstof. Ek het na 'n paar opsies van Thermo gekyk, maar het nie voldoende data oor een van die twee gevind nie.

Ek beplan spesifiek om 'n enkelselpopulasie met twee verskillende kleurstowwe te vlek, elke gekleurde populasie tussenin ietwat anders te behandel, en dan saam te kweek en later uitlesings te onderskei. Teenliggaamkleuring vir 'n oppervlakmerker sou moontlik wees met Fab-fragmente (die teenliggaampies self kan inmeng met selaktivering tydens kweek). Daarom sal ek eerder 'n rooispektrum kleurstof soos CFSE of PKH26 gebruik, aangesien dit goedkoper en moontlik is vir sekondêre gebruik met ander sellyne.

Ek het verskeie sitometers beskikbaar en die spesifieke emittansie maak nie saak nie, want ons kan kies wat algemeen moontlik is (LSR/Fortessa).

Ek is dus op soek na 'n kleurstof met emittansie in die rooi fluoressensiespektrum wat kleurprotokolle beskikbaar het wat vir my doeleindes aangepas kan word.

Is iemand bereid om hul ervarings te deel?

Wysig

  • Verduidelik dat ek 'n 'geen-teenliggaam-kleuring' nodig het
  • Verhelderde vraag met betrekking tot biologiese vraag en FACS

Ek het die ThermoFisher-handelsmerk van CellTrace-kleurstowwe gebruik. Spesifiek, ek het twee populasies selle saamgekweek, een met CellTrace Far Red in die APC-kanaal en nog een met CellTrace Yellow in die PE-kanaal. My keuse is deels gelei deur 'n produkoorsig deur 'n ander laboratorium wat die relatief lae sitotoksisiteit van hierdie produkte voorhou.

Die protokol is redelik reguit vorentoe. Dit is ook beskikbaar in CFSE en Violet, hoewel ek dit nie getoets het nie. Hierdie kleurstowwe is ook geoptimaliseer vir limfosiete, en daarom sal ek aanbeveel om te titreer as jy enigiets anders vlek.

Die kleurstowwe is nogal helder, en dus was daar probleme met byvoorbeeld die kleur van APC-Cy7. Ek het uiteindelik my CellTrace-kleurstowwe as die enigste merkers op hul onderskeie lasers gelaat en my fenotipering op die 355nm- en 405nm-lasers gestapel.

Vir vergoeding kan jy dalk net by selle bly, maar in die produkhandleiding vir CellTrace sê dit egter:

"Die CellTrace™-reagense diffundeer maklik in selle in en bind kovalent aan intrasellulêre amiene, wat lei tot stabiele, goed behoue ​​fluoresserende kleuring wat met aldehiedfiksatiewe vasgemaak kan word."

So as jy die ArC amien-reaktiewe komp-krale vir LIVE/DEAD-stelle gebruik, kan jy dalk net komp-krale daarmee maak. Ek sal dit verifieer wanneer ek terug by die werk is indien nodig, aangesien ek dit nie self gedoen het nie, maar dit is 'n goeie gedagte!


Daar is 'n aantal verskillende kleurstowwe moontlik, soos u in hierdie figuur kan sien (van hier af):

'n Goeie oorsig kan gevind word in die "Selecting Reagents for Multicolor Flow Cytometry"-toepassingsnota-publikasie van BD (in verwysing 1) en ook die Fluorochroom-spesifikasies van BD (verwysing 2).

Verwysings:

  1. Kies reagense vir veelkleurige vloeisitometrie
  2. BD Lewenswetenskappe Fluorochroom-spesifikasies


Kyk die video: Fashion Liveshop Rooi (Oktober 2022).