Inligting

Lab 17: Serologie, Direkte en Indirekte Serologiese Toetsing - Biologie

Lab 17: Serologie, Direkte en Indirekte Serologiese Toetsing - Biologie


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

BESPREKING

A. INLEIDING TOT SEROLOGIESE TOETSING

Die aanpasbare immuunresponse verwys na die vermoë van die liggaam (self) om spesifieke vreemde antigene (nie-self) te herken wat sy biologiese integriteit bedreig. Daar is twee hooftakke van die adaptiewe immuunresponse:

1. humorale immuniteit: humorale immuniteit behels die produksie van teenliggaammolekules in reaksie op 'n antigeen en word bemiddel deur B-limfosiete.

2. sel-gemedieerde immuniteit: Sel-gemedieerde immuniteit behels die produksie van sitotoksiese T-limfosiete, geaktiveerde makrofage, geaktiveerde NK-selle en sitokiene in reaksie op 'n antigeen en word bemiddel deur T-limfosiete.

Om die immuunresponse te verstaan, moet ons eers verstaan ​​wat met die term antigeen bedoel word. Tegnies, 'n antigeen word gedefinieer as 'n stof wat met teenliggaampolekules en antigeenreseptore op limfosiete reageer. An immunogeen is 'n antigeen wat deur die liggaam as nie-self erken word en 'n aanpasbare immuunrespons stimuleer. Vir eenvoud word daar gewoonlik na beide antigene en immunogene verwys as antigene.

Chemies, antigene is groot molekulêre gewig proteïene (insluitend gekonjugeerde proteïene soos glikoproteïene, lipoproteïene en nukleoproteïene) en polisakkariede (insluitend lipopolisakkariede). Hierdie proteïen- en polisakkariedantigene word op die oppervlaktes van virusse en selle gevind, insluitend mikrobiese selle (bakterieë, swamme, protosoë) en menslike selle.

Soos hierbo genoem, is die B-limfosiete en T-limfosiete die selle wat aanpasbare immuunresponse uitvoer. Die liggaam herken 'n antigeen as vreemd wanneer daardie antigeen aan die oppervlaktes van B-limfosiete en T-limfosiete bind deur middel van antigeen-spesifieke reseptore wat 'n vorm het wat ooreenstem met dié van die antigeen, soortgelyk aan ineensluitende stukke van 'n legkaart. Die antigeenreseptore op die oppervlaktes van B-limfosiete is teenliggaampolekules wat B-selreseptore of sIg genoem word; die reseptore op die oppervlaktes van T-limfosiete word T-selreseptore (TCR'e) genoem.

Die werklike gedeeltes of fragmente van 'n antigeen wat reageer met reseptore op B-limfosiete en T-limfosiete, sowel as met vrye teenliggaammolekules, word genoem epitope. Die grootte van 'n epitoop word algemeen beskou as gelykstaande aan 5-15 aminosure of 3-4 suikerreste. Sommige antigene, soos polisakkariede, het gewoonlik baie epitope, maar almal van dieselfde spesifisiteit. Dit is omdat polisakkariede uit honderde suikers met vertakkende suikersykettings saamgestel kan word, maar gewoonlik net een of twee verskillende suikers bevat. As gevolg hiervan is die meeste "vorms" langs die polisakkaried dieselfde (sien Fig. 1). Ander antigene soos proteïene het gewoonlik baie epitope van verskillende spesifisiteite. Dit is omdat proteïene gewoonlik honderde aminosure lank is en uit 20 verskillende aminosure bestaan. Sekere aminosure is in staat om met ander aminosure in die proteïenketting te reageer en dit veroorsaak dat die proteïen op homself vou en 'n komplekse driedimensionele vorm aanneem. As gevolg hiervan is daar baie verskillende "vorms" op die proteïen (sien Fig. 2). Daarom is proteïene meer immunogenies as polisakkariede; hulle is chemies meer kompleks.

'n Mikrobe, soos 'n enkele bakterie, het baie verskillende proteïene (en polisakkariede) op sy oppervlak wat gesamentlik sy verskillende strukture vorm, en elke verskillende proteïen kan baie verskillende epitope hê. Daarom, immuunresponse is gerig teen baie verskillende dele of epitope van dieselfde mikrobe.

Flitsanimasie van epitope wat reageer met spesifieke sIg aan
B-limfosiete.

html5-weergawe van animasie vir iPad wat epitope toon wat met spesifieke B-selreseptor op 'n B-limfosiete reageer.

In terme van aansteeklike siektes, kan die volgende as antigene optree:

1.Mikrobiese strukture (selwande, kapsules, flagella, pili, virale kapsiede, omhulsel-geassosieerde glikoproteïene, ens.); en

2. Mikrobiese gifstowwe

Seker nie-aansteeklike materiaal kan ook as antigene optree as hulle deur die liggaam as "nieself" herken word. Dit sluit in:

1. Allergene (stof, stuifmeel, hare, kos, skilfers, byegif, dwelms en ander middels wat allergiese reaksies veroorsaak);

2. Vreemde weefsels en selle (van oorplantings en oortappings); en

3. Die liggaam se eie selle wat die liggaam nie as "normale self" herken nie (kankerselle, besmette selle, selle betrokke by outo-immuun siektes).

Teenliggaampies of immunoglobuliene is spesifieke proteïenkonfigurasies wat deur B-limfosiete en plasmaselle geproduseer word in reaksie op 'n spesifieke antigeen en in staat is om met daardie antigeen te reageer. Teenliggaampies word in die limfoïede weefsel en sodra dit geproduseer is, word hoofsaaklik in die aangetref plasma gedeelte van die bloed (die vloeibare fraksie van die bloed voor stolling). Serum is die vloeibare fraksie van die bloed na stolling.

Daar is 5 klasse menslike teenliggaampies: IgG, IgM, IgA, IgD en IgE. Die eenvoudigste teenliggaampies, soos IgG, IgD en IgE, is "Y"-vormige makromolekules genoem monomere wat bestaan ​​uit vier glikoproteïenkettings. Daar is twee identiese swaar kettings met 'n hoë molekulêre gewig wat wissel met die klas teenliggaampies. Daarbenewens is daar twee identiese ligte kettings van een van twee variëteite: kappa of gamma. Die ligte kettings het 'n laer molekulêre gewig. Die vier glikoproteïenkettings is aan mekaar verbind deur disulfied (S-S) bindings en niekovalente bindings (sien Fig. 3A). Bykomende S-S-bindings vou die individuele glikoproteïenkettings in 'n aantal afsonderlike bolvormige domeine. Die area waar die bokant van die "Y" by die onderkant aansluit, word die skarnier genoem. Hierdie area is buigsaam om die teenliggaam in staat te stel om aan pare epitope op verskillende afstande van mekaar op 'n antigeen te bind.

Die twee punte van die "Y" monomeer word na verwys as die Fantastiese porsies van die teenliggaam (sien Fig. 3A). Die eerste 110 aminosure of eerste domein van beide die swaar en ligte ketting van die Fab-streek van die teenliggaam verskaf spesifisiteit vir binding van 'n epitoop op 'n antigeen. Die Fab porsies verskaf spesifisiteit vir die binding van 'n epitoop op 'n antigeen. Die onderste deel van die "Y" word die genoem Fc gedeelte en hierdie deel is verantwoordelik vir die biologiese aktiwiteit van die teenliggaam (sien diagram van IgG; Fig. Afhangende van die klas teenliggaampies, sluit biologiese aktiwiteite van die Fc-gedeelte van teenliggaampies die vermoë in om die komplementbaan (IgG & IgM) te aktiveer, aan fagosiete (IgG, IgA) te bind, of bind aan mastselle en basofiele (IgE).

Twee klasse teenliggaampies is meer kompleks. IgM is 'n pentameer (sien Fig. 3B), wat bestaan ​​uit 5 "Y"-agtige molekules wat by hul Fc-gedeeltes verbind is, en sekretoriese IgA is 'n dimeer wat bestaan ​​uit 2 "Y"-agtige molekules (sien Fig. 3C).

Vir meer inligting oor antigene, teenliggaampies en teenliggaampiesproduksie, sien die volgende leervoorwerpe in jou lesinggids:

  • Antigene; Eenheid 6, Afdeling IA2
  • Teenliggaamstruktuur; Eenheid 6 Afdeling IIA2

Serologie verwys na die gebruik van antigeen-teenliggaamreaksies in die laboratorium vir diagnostiese doeleindes. Sy naam kom van die feit dat serum, die vloeibare gedeelte van die bloed waar teenliggaampies gevind word word in toetsing gebruik. Serologiese toetsing kan op twee verskillende maniere in die kliniese laboratorium gebruik word:

a. Om onbekende antigene te identifiseer (soos mikroörganismes). Dit word genoem direkte serologiese toetsing. Direkte serologiese toetsing gebruik 'n voorbereiding bekende teenliggaampies, genoem antiserum, om 'n onbekende antigeen soos 'n mikro-organisme.

b. Om teenliggaampies op te spoor wat teen 'n spesifieke antigeen in die pasiënt se serum gemaak word. Dit word genoem indirekte serologiese toetsing. Indirekte serologiese toetsing is die prosedure waardeur teenliggaampies in 'n persoon se serum wat deur daardie individu gemaak word teen 'n antigeen wat met 'n spesifieke siekte geassosieer word, word opgespoor met behulp van a bekende antigeen.

Antigeen-teenliggaamreaksies kan deur 'n verskeidenheid tegnieke in die laboratorium opgespoor word. Sommige van die algemeen gebruikte tegnieke vir die waarneming van in vitro antigeen-teenliggaamreaksies word kortliks hieronder beskryf.

a. Agglutinasie

Bekende antiserum veroorsaak dat bakterieë of ander deeltjies antigene saamklonter of agglutineer. Molekulêre-grootte antigene kan opgespoor word deur die bekende teenliggaampies aan groter, onoplosbare deeltjies soos latexdeeltjies of rooibloedselle te heg om die agglutinasie met die blote oog sigbaar te maak.

b. Neerslag

Bekende antiserum word gemeng met oplosbare toetsantigeen en 'n troebel neerslag vorm by die sone van optimum antigeen-teenliggaam verhouding.

c. Komplement-fiksasie

Bekende antiserum word met die toetsantigeen gemeng en komplement word bygevoeg. Skaaprooibloedselle en hemolisiene (teenliggaampies wat die skaaprooibloedselle in die teenwoordigheid van vrye komplement lyseer) word dan bygevoeg. Indien die komplement in die eerste antigeen-teenliggaamreaksie vasgebind word, sal dit nie beskikbaar wees vir die skaaprooibloedsel-hemolisienreaksie nie en sal daar geen hemolise wees nie. 'n Negatiewe toets sal hemolise tot gevolg hê.

d. Ensiem-gekoppelde immunosorbant-toets of ELISA (ook bekend as Ensiem-immuno-toets of EIA)

Toetsantigene van monsters word deur 'n buis (of 'n membraan) gevoer wat met die ooreenstemmende spesifieke bekende teenliggaampies bedek is en word op die wande van die buis (of op die membraan) vasgevang. Bekende teenliggaampies waaraan 'n ensiem chemies geheg is, word dan deur die buis (of membraan) gevoer waar hulle met die vasgevangde antigene kombineer. Substraat vir die aangehegte ensiem word dan bygevoeg en die hoeveelheid antigeen-teenliggaamkompleks wat gevorm word, is eweredig aan die hoeveelheid ensiem-substraatreaksie soos aangedui deur 'n kleurverandering.

e. Radioaktiewe bindingstegnieke

Toetsantigene van monsters word deur 'n buis gevoer wat met die ooreenstemmende spesifieke bekende teenliggaampies bedek is en word op die wande van die buis vasgevang. Bekende teenliggaampies waaraan 'n radioaktiewe isotoop chemies geheg is, word dan deur die buis gevoer waar hulle met die vasgevangde antigene kombineer. Die hoeveelheid antigeen-teenliggaamkompleks wat gevorm word, is eweredig aan die mate van radioaktiwiteit.

f. Fluorescerende teenliggaampies tegniek

'n Fluorescerende kleurstof is chemies aan die bekende teenliggaampies geheg. Wanneer die fluoresserende teenliggaam met die antigeen reageer, sal die antigeen fluoressieer wanneer dit met 'n fluoresserende mikroskoop bekyk word.

B. DIREKTE SEROLOGIESE TOETSING: DIE GEBRUIK VAN ANTIGEEN-TEGENLIGGAAMREAKSIES IN DIE LABORATORIUM OM ONBEKENDE ANTIGENE SOOS MIKROORGANISME TE IDENTIFISEER.

Hierdie tipe serologiese toetsing gebruik bekende antiserum (serum wat spesifieke bekende teenliggaampies bevat). Die voorbereiding van bekende teenliggaampies word op een van twee maniere voorberei: in diere of deur hibridoomselle.

1. Voorbereiding van bekende antisera by diere.

Voorbereiding van bekende antiserum in diere behels die inenting van diere met spesifieke bekende antigene soos 'n spesifieke stam van 'n bakterie. Nadat die dier se immuunresponse tyd gehad het om teenliggaampies teen daardie antigeen te produseer, word die dier gebloei en die bloed word toegelaat om te stol. Die resulterende vloeibare gedeelte van die bloed is die serum en dit sal teenliggaampies bevat wat spesifiek vir die ingespuite antigeen is.

Een van die probleme met die gebruik van teenliggaampies wat in diere voorberei is (deur die dier met 'n spesifieke antigeen in te spuit en die serum te versamel nadat teenliggaampies geproduseer is) is dat tot 90% van die teenliggaampies in die dier se serum teenliggaampies kan wees wat die dier gemaak het. "op sy eie" teen omgewingsantigeene, eerder as dié wat teen die ingespuite antigeen gemaak word. Die ontwikkeling van monoklonale teenliggaampiestegniek het daardie probleem grootliks opgelos.

2. Voorbereiding van bekende teenliggaampies deur monoklonaal teenliggaam tegniek.

Een van die groot deurbrake in immunologie het plaasgevind toe monoklonale teenliggaamtegniek ontwikkel is. Monoklonale teenliggaampies is teenliggaampies van 'n enkele spesifieke tipe. In hierdie tegniek word 'n dier met die spesifieke antigeen (sien Fig. 4, stap 1) ingespuit vir die gewenste teenliggaam. Na gepaste tyd vir teenliggaamproduksie, word die dier se milt verwyder. Die milt is ryk aan plasmaselle en elke plasmasel produseer slegs een spesifieke tipe teenliggaampie. Plasmaselle sal egter nie kunsmatig in selkultuur groei nie. Daarom word 'n plasmasel wat die verlangde teenliggaam produseer saamgesmelt met 'n myeloomsel, 'n kankersel van beenmurg wat vinnig sal groei in selkultuur, om 'n hybridoom sel (sien Fig. 4, stap 2). Die hibridoomsel het die eienskappe van beide ouerselle. Dit sal produseer die spesifieke teenliggaampies soos die plasmasel en sal ook geredelik groei in selkultuur soos die myeloomsel. Die hibridoomselle word kunsmatig in groot kuipe gekweek waar hulle groot hoeveelhede van die spesifieke teenliggaam produseer (sien Fig. 4, stap 3).

Monoklonale teenliggaampies word nou gereeld in mediese navorsing en diagnostiese serologie gebruik en word eksperimenteel gebruik in die behandeling van sekere kankers en 'n paar ander siektes.

3. Die konsep en algemene prosedure vir direkte serologiese toetsing.

Die konsep en algemene prosedure vir die gebruik van antigeen-teenliggaamreaksies om onbekende antigene te identifiseer, is soos volg:

  • Konsep:

    Hierdie toets is gebaseer op die feit dat antigeen-teenliggaamreaksies is baie spesifiek. Teenliggaampies reageer gewoonlik slegs met die antigeen wat hul produksie in die eerste plek gestimuleer het, en is net so spesifiek soos 'n ensiem-substraat reaksie. As gevolg hiervan kan 'n mens gebruik bekende antiserum (berei deur diere-inokulasie of monoklonale teenliggaampietegniek soos hierbo bespreek) om te identifiseer onbekende antigene soos 'n mikro-organisme.

  • Algemene prosedure:

    'n Opskorting van die onbekende antigeen geïdentifiseer te word, word gemeng met bekende antiserum vir daardie antigeen. 'n Mens soek dan 'n antigeen-teenliggaam-reaksie.

Voorbeelde van serologiese toetse wat gebruik word om onbekende mikroörganismes te identifiseer, sluit in die serologiese tipering van Shigella en Salmonella (Lab 13), die Lancefield-tipering van beta-streptokokke (Lab 14), en die serologiese identifikasie van Neisseria gonorrhoeae en Neisseria meningitidis (Lab 16). Serologiese toetse wat gebruik word om antigene te identifiseer wat nie mikroörganismes is nie, sluit bloedtipering, weefseltipering en swangerskaptoetsing in.

4. Voorbeelde van direkte serologiese toetsing om onbekende antigene te identifiseer

Soos hierbo genoem, gebruik hierdie tipe serologiese toetsing bekende antiserum (teenliggaampies) om onbekende antigene te identifiseer. Daar sal vandag in die laboratorium na vier sulke toetse gekyk word.

a. Serologiese Tik van Shigella

Daar is vier verskillende serologiese subgroepe van Shigella, elk wat ooreenstem met 'n ander spesie:

  • subgroep A = Shigella dysenteriae
  • subgroep B = Shigella flexneri
  • subgroep C = Shigella boydii
  • subgroep D = Shigella sonnei

Bekende antiserum is beskikbaar vir elk van die 4 subgroepe van Shigella hierbo gelys en bevat teenliggaampies teen die selwand ("O" antigene) van Shigella. Die verdagte Shigella (die onbekende antigeen) word in elk van 4 sirkels op 'n skyfie geplaas en 'n ander bekende antiserum (A, B, C of D) word dan by elke sirkel gevoeg. 'n Positiewe antigeen-teenliggaamreaksie verskyn as 'n klontering of agglutinasie van die Shigella (sien Fig. 5).

b. Serologiese tik van streptokokke

Die Clearview® Strep A Exact II-peilstok is 'n kwalitatiewe serologiese toets vir groep A streptokokke antigeen op te spoor (die onbekende antigeen) direk vanaf keeldeppers en word gebruik as hulpmiddel in diagnose van streptokokke faringitis veroorsaak deur Streptococcus pyogenes (Groep A Beta Streptokokke).

Die toets bestaan ​​uit 'n membraanstrook waarmee vooraf bedek is haas anti-Strep 'n Teenliggaam-rooi latex konjugaat (bekende teenliggaam met rooi latex deeltjies aangeheg) geleë in 'n pad aan die begin van die strook. Dit is ook vooraf bedek met konyn anti-Strep A teenliggaampie (bekende teenliggaam sonder aangehegte rooi latex) wat geïmmobiliseer word by die toetslyn waar die toetsresultate gelees word (sien Fig. 6A). Die rooi latex deeltjies geheg aan die konyn anti-Strep A teenliggaam is wat uiteindelik die "positiewe" rooi band veroorsaak.

Wanneer die toetsstrook in die onttrekte monster gedompel word, word die Groep A streptokokke antigeen onttrek uit die Streptococcus pyogenes op die keeldepper van 'n persoon met strep keel begin chromatografies op die membraan beweeg en bind aan die rooikleurige bekende teenliggaam-latex-konjugaat in die pad geleë aan die begin van die strook, wat 'n Strep A-antigeen-teenliggaamkompleks vorm (sien Fig. 6B). Hierdie Strep A-antigeen-teenliggaamkompleks beweeg steeds op die membraan na die toetslyngebied waar die geïmmobiliseerde konyn-anti-Strep A-teenliggaampies geleë is.

Indien Groep A streptokokke-antigeen in die keeldepper teenwoordig is, a rooi-gekleurde toebroodjie van teenliggaam/Strep A antigeen/rooi latex gekonjugeerde teenliggaampies vorm in die toetslynstreek van die strook (sien Fig. 6C). Die rooi kleur by die kontrolelyngebied verskyn wanneer genoeg reagens die kontrolegebied bereik het en dui aan dat die toets klaar is. As gevolg daarvan, 'n positiewe toets vir Groep A Strep-antigeen verskyn as 'n rooi band in die toetsuitslag area en 'n rooi band in die kontrole area (sien Fig. 6C).

As daar geen Groep A Streptokokke-antigeen in die keeldepper teenwoordig is nie geen rooi band verskyn in die toetsuitslagstreek nie van die strook en 'n enkele rooi band verskyn in die beheerlynstreek, wat 'n negatiewe toets vir Groep A Strep-antigeen aandui (sien Fig. 6D).

Flitsanimasie wat serologiese identifikasie van
Groep A Streptokokke, deel-1.

http5 weergawe van animasie vir iPad wat serologiese identifikasie van
Groep A Streptokokke, deel-1.

Flitsanimasie wat serologiese identifikasie van
Groep A Streptokokke, deel-2.

http5 weergawe van animasie vir iPad wat serologiese identifikasie van
Groep A Streptokokke, deel-2.

c. Serologiese toetse om swangerskap te diagnoseer

Die Alere® hCG-peilstok is 'n kwalitatiewe serologiese toets vir vroeë swangerskap op te spoor. Die hormoon menslike choriongonadotropien (hCG), wat deur die plasenta geproduseer word, verskyn in die serum en urine van swanger vroue. Die hCG bestaan ​​uit twee subeenhede - alfa en beta. Die Alere® hCG Dipstick is 'n eenstap swangerskapstoets wat vlakke van hCG so laag as 25 mlU/ml opspoor. Menslike choriongonadotropien (hCG), die onbekende antigeen waarvoor 'n mens toets, word in die urine geïdentifiseer deur te gebruik bekende muis monoklonale teenliggaampies teen die beta subeenheid van hCG gebind aan kolloïdale goud, wat rooi van kleur is. Dit gebruik ook bekende bok poliklonale teenliggaampies teen die alfa subeenheid van hCG wat gebind is aan die toetsresultaatstreek van die peilstok.

Soos die Strep A-toets hierbo genoem, gebruik hierdie toets 'n kleur-immunochromatografiese toets om die antigeen-teenliggaamreaksie op te spoor. Die toets bestaan ​​uit 'n membraanstrook wat vooraf bedek is met bekende muis anti-beta hCG-teenliggaam-kolloïdale goue konjugaat (bekende teenliggaam met rooi kolloïdale goud deeltjies aangeheg) geleë in 'n pad aan die begin van die strook. Dit is ook vooraf bedek met bekende bok anti-alfa hCG teenliggaampie (bekende teenliggaam sonder aangehegte rooi kolloïdale goud) wat geïmmobiliseer word by die toetslyn waar die toetsresultate gelees word (sien Fig. 7B1). Die rooi kolloïdale gouddeeltjies wat aan die muis-anti-alfa-hCG-teenliggaam geheg is, is wat uiteindelik die "positiewe" rooi band veroorsaak.

Wanneer die toetsstrook in die urinemonster gedompel word, word die hCG begin chromatografies teen die membraan op beweeg en bind aan die rooikleurige bekende anti-beta hCG-teenliggaam-goud konjugaat in die pad geleë aan die begin van die strook, wat 'n hCG-antigeen-teenliggaamkompleks vorm (sien Fig. 7B2). Hierdie hCG-antigeen-teenliggaamkompleks beweeg steeds teen die membraan op na die toetslyngebied waar die geïmmobiliseerde bekende bok-anti-beta-hCG-teenliggaampies gebind word.

As hCG in die urine teenwoordig is, a rooi-gekleurde toebroodjie van anti-beta-teenliggaampies/hCG-antigeen/rooigoud gekonjugeerde anti-alfa-teenliggaampies in die toetslynstreek van die strook (sien Fig. 7B3). As gevolg daarvan, 'n positiewe toets vir hCG-antigeen verskyn as 'n rooi band in die toetsresultaatarea en 'n rooi band in die kontrole area (sien Fig. 7B3).

As daar is geen waarneembare hCG-antigeen nie teenwoordig in die urine geen rooi band verskyn in die toetsuitslagstreek nie van die strook en 'n enkele rooi band verskyn in die beheerlynstreek, wat 'n negatiewe toets vir hCG-antigeen aandui (sien Fig. 7B4).

Flitsanimasie wat serologiese identifikasie van
hCG, deel-1.

http5 weergawe van animasie vir iPad wat serologiese identifikasie van
hCG, deel-1.

Flitsanimasie wat serologiese identifikasie van
hCG, deel-2.

http5 weergawe van animasie vir iPad wat serologiese identifikasie van
hCG, deel-2.

d. Identifikasie van mikroörganismes deur die direkte fluoresserende teenliggaampietegniek te gebruik

Seker fluoresserende kleurstowwe chemies kan wees geheg aan die bekende teenliggaampolekules in antiserum. Die bekende fluoresserende teenliggaam word dan gemeng met die onbekende antigeen, soos 'n mikro-organisme, vasgemaak aan 'n skyfie. Na was, om enige fluoresserende teenliggaampies wat nie aan die antigeen gebind is te verwyder nie, word die skyfie bekyk met 'n fluoresserende mikroskoop.

As die fluoresserende teenliggaam met die onbekende antigeen gereageer het, sal die antigeen gloei of fluoressens onder die fluoresserende mikroskoop. As die teenliggaam nie met die antigeen gereageer het nie, sal die teenliggaampies van die skyfie afgewas word en die antigeen sal nie fluoresseer nie.

Flitsanimasie wat 'n positiewe direkte fluoresserende teenliggaamtoets toon.

http5 weergawe van animasie vir iPad wat 'n positiewe direkte fluoresserende teenliggaamtoets toon.

Flitsanimasie wat 'n negatiewe direkte fluoresserende teenliggaamtoets toon.

http5-weergawe van animasie vir iPad wat 'n negatiewe direkte fluoresserende teenliggaamtoets toon.

Byvoorbeeld, in die direkte fluoresserende teenliggaam toets vir Neisseria gonorrhoeae, wat kortliks in laboratorium 16 genoem word, die onbekende antigeen, vermoed Neisseria gonorrhoeae,word aan 'n mikroskoopskyfie vasgemaak. Bekende fluoresserende teenliggaampies gemaak teen N. gonorrhoeae word dan bygevoeg (sien Fig. 8, stap 1) en die skyfie word dan gewas om enige fluoresserende teenliggaampie wat nie aan die antigeen gebind is nie, te verwyder. Die skyfie word dan onder 'n fluoresserende mikroskoop bekyk.

As die onbekende antigeen is Neisseria gonorrhoeae, die bekende teenliggaampies teen N. gonorrhoeae met aangehegte fluoresserende kleurstof sal aan die bakterie bind en sal nie afwas nie. Die bakterieë sal fluoresseer wanneer dit onder 'n fluoresserende mikroskoop gesien word (sien Fig. 8, stap 2 en Fig. 10). As die onbekende antigeen nie N. gonorrhoeae, sal die bekende fluoresserende teenliggaampies teen die skyfie afwas en die bakterieë sal nie fluoresseer wanneer dit onder 'n fluoresserende mikroskoop gesien word nie.

Baie bakterieë, virusse en swamme kan met hierdie tegniek geïdentifiseer word.

C. INDIREKTE SEROLOGIESE TOETSE: DIE GEBRUIK VAN ANTIGEEN-TEGENLIGGAAMREAKSIES IN DIE LABORATORIUM OM SIEKTE INDIREKTE DIAGNOSE DEUR TEGENLIGGAAMHEDE IN 'N PERSOON SE SERUM OP TE SPEEK WAT TEGEN 'N SIEKTEANTIGEEN GEPRODUSEER IS.

Indirekte serologiese toetsing is die prosedure waardeur teenliggaampies in 'n persoon se serum wat deur daardie individu gemaak word teen 'n antigeen wat met 'n spesifieke siekte geassosieer word, word opgespoor met behulp van a bekende antigeen.

1. Die konsep en algemene prosedure vir indirekte serologiese toetsing.

Die konsep en algemene prosedure vir hierdie tipe serologiese toetsing is soos volg:

  • Konsep:

    Hierdie tipe toetsing is gebaseer op die feit dat teenliggaampies word slegs geproduseer in reaksie op 'n spesifieke antigeen. Met ander woorde, 'n persoon sal nie teenliggaampies teen 'n siekte-antigeen produseer nie, tensy daardie antigeen in die liggaam is wat teenliggaamproduksie stimuleer.

  • Algemene prosedure:

    'n Voorbeeld van die pasiënt se serum (die vloeibare gedeelte van die bloed na stolling en wat teenliggaampies teen die siekte-antigeen bevat indien die persoon die siekte het of gehad het) word gemeng met die bekende antigeen vir daardie vermoedelike siekte. 'n Mens soek dan 'n antigeen-teenliggaam-reaksie.

    Voorbeelde van serologiese toetse om siekte te diagnoseer deur die opsporing van teenliggaampies in die pasiënt se serum sluit in die verskillende serologiese toetse vir sifilis of STS (soos die RPR, die VDRL en die FTA-ABS toetse), die toetse vir aansteeklike mononukleose, die toetse vir die Menslike Immuniteitsgebrekvirus (MIV), die toetse vir sistemiese lupus erythematosus, en toetse vir 'n verskeidenheid ander virale infeksies.

2. Kwalitatiewe en kwantitatiewe serologiese toetse.

Indirekte serologiese toetse kan kwalitatief of kwantitatief wees. A kwalitatief toets bespeur slegs die teenwoordigheid of afwesigheid van spesifieke teenliggaampies in die pasiënt se serum en word dikwels vir siftingsdoeleindes gebruik. A kwantitatief toets gee die titer of hoeveelheid van daardie teenliggaam in die serum. Titer dui aan hoe ver jy die pasiënt se serum kan verdun en dit steeds genoeg teenliggaampies bevat om 'n waarneembare antigeen-teenliggaamreaksie te gee. Met ander woorde, hoe meer teenliggaampies deur die liggaam geproduseer word, hoe meer kan jy die persoon se serum verdun en steeds 'n reaksie sien. Kwantitatiewe serologiese toetse word dikwels gebruik om die vordering van 'n siekte te volg deur te kyk na 'n styging en daaropvolgende daling in teenliggaampies.

3. Voorbeelde van indirekte serologiese toetse om teenliggaampies in die pasiënt se serum op te spoor

a. Die RPR-toets vir sifilis

Sifilis is 'n seksueel oordraagbare siekte wat deur die spirocheet veroorsaak word Treponema pallidum. Die RPR (Rapid Plasma Reagin) Card®-toets is 'n vermoedelike serologiese siftingstoets vir sifilis. Die serum van 'n persoon met sifilis bevat 'n nie-spesifieke anti-lipied teenliggaampie (tradisioneel genoem herwin), wat nie in normale serum gevind word nie. Die presiese aard van die anti-lipied (reagin) teenliggaam is nie bekend nie, maar daar word gedink dat 'n sifilis-infeksie die afbreek van die pasiënt se eie weefselselle aanhits. Vetterige stowwe wat vrygestel word, kombineer dan met proteïene van Treponema pallidum om 'n antigeen te vorm wat die liggaam stimuleer om te produseer teenliggaampies teen beide die liggaam se weefsellipiede (nie-spesifiek of nie-treponemal) sowel as die T. pallidum proteïen (spesifiek of treponemal). Die RPR Card®-toets bespeur die nie-spesifieke antilipied-teenliggaam en word na verwys as 'n nie-treponemale toets vir sifilis.

- skandeerelektronmikrograaf van die spirogeet Treponema pallidum; met vergunning van CDC.

Daar moet onthou word dat toetse vir die teenwoordigheid van hierdie niespesifieke antilipied-teenliggaampies bedoel is as 'n vermoedelike siftingstoets vir sifilis. Soortgelyke reagin-agtige teenliggaampies kan ook teenwoordig wees as gevolg van ander siektes soos malaria, melaatsheid, aansteeklike mononukleose, sistemiese lupus eritematosus, virale longontsteking, masels en kollageensiektes en kan biologiese vals-positiewe resultate (BFP) gee. Bevestigende toetse moet gemaak word vir die teenwoordigheid van spesifieke teenliggaampies teen die T. pallidum self. Die bevestigende toets vir sifilis is die FTA-ABS toets wat hieronder bespreek word. Enige serologiese toets vir sifilis word algemeen na verwys as 'n STS (Serologiese toets vir sifilis).

Die bekende RPR-antigeen bestaan ​​uit kardiolipien, lesitien, en cholesterol gebind aan houtskooldeeltjies om die reaksie met die blote oog sigbaar te maak. As die pasiënt sifilis het, sal die antilipied-teenliggaampies in sy of haar serum kruisreageer met die bekende RPR-lipiedantigene wat 'n sigbare klont van die houtskooldeeltjies gee (sien Fig. 1).

Ons sal 'n doen kwantitatief RPR Card® toets vandag in die laboratorium. Hou in gedagte dat 'n kwantitatiewe toets 'n mens toelaat om die titer of hoeveelheid van 'n sekere teenliggaam in die serum. In hierdie toets word 'n konstante hoeveelheid RPR-antigeen by verdunnings van die pasiënt se serum gevoeg. Die mees verdunde monster van die pasiënt se serum wat steeds genoeg teenliggaampies bevat om 'n sigbare antigeen-teenliggaamreaksie te gee, word as die titer gerapporteer.

b. Serologiese toetse vir aansteeklike mononukleose

Gedurende die verloop van aansteeklike mononukleose, wat deur die Epstein-Barr-virus (EBV) veroorsaak word, produseer die liggaam nie-spesifieke heterofiele teenliggaampies wat nie in normale serum voorkom nie. Soos dit blyk, hierdie heterofiele teenliggaampies sal kruisreageer met glikoproteïen-antigene wat op die oppervlak van rooibloedselle (RBC's) van verskeie diere voorkom, insluitend perde, skape en koeie, wat veroorsaak dat die RBC's agglutineer. Hierdie kruisreagerende glikoproteïen-antigene word dikwels genoem Paul-Bunnell antigene na hul ontdekkers.

Die aansteeklike mononukleose serologiese toets wat vandag gedemonstreer word, is 'n vinnige kwalitatief toets vir aansteeklike mononukleose wat gebruik Paul-Bunnell antigene geadsorbeer aan mikroskopiese wit latex deeltjies as die "bekende antigeen." Hierdie antigene bind spesifiek aan die heterofiele teenliggaampies wat in die serum van mense met aansteeklike mononukleose gevind word veroorsaak dat die latexdeeltjies saamklonter of agglutineer (sien Fig. Kwantitatiewe toetse kan dan gedoen word om die titer van heterofiele teenliggaampies te bepaal en die vordering van die siekte te volg.

c. Serologiese toetse vir sistemiese lupus erythematosus (SLE)

Sistemiese lupus erythematosus of SLE is 'n sistemiese outo-immuun siekte. Immuunkomplekse word gedeponeer tussen die dermis en die epidermis, en in gewrigte, bloedvate, glomeruli van die niere en die sentrale senuweestelsel. Dit is vier keer meer algemeen by vroue as by mans. In SLE word outo-teenliggaampies teen komponente van DNA gemaak. Hierdie toets is spesifiek vir die serum anti-deoksiribonukleoproteïen teenliggaampies geassosieer met SLE. Die bekende antigeen is deoksiribonukleoproteïen wat aan latexdeeltjies geadsorbeer word om die reaksie meer sigbaar vir die oog te maak (sien Fig. 3). Hierdie is 'n kwalitatief toets wat gebruik word om te sif vir die teenwoordigheid van die siekte en om die verloop daarvan te monitor.

d. Bespeur teenliggaampies met behulp van die indirekte fluoresserende teenliggaamtegniek: Die FTA-ABS-toets vir sifilis

Die indirek fluoresserende teenliggaampies tegniek behels drie verskillende reagense:

a. Die pasiënt se serum (wat teenliggaampies teen die siekte-antigeen bevat indien die siekte teenwoordig is)

b. Bekende antigeen vir die vermoedelike siekte

c. Fluorescerende anti-menslike gamma globulien teenliggaampies (teenliggaampies gemaak in 'n ander dier teen die Fc-gedeelte van menslike teenliggaampies (sien Fig. 9) deur 'n dier met menslike serum in te spuit. 'n Fluoresserende kleurstof word dan chemies aan die anti-mens gammaglobulien (anti-HGG) teenliggaampies geheg.

Die FTA-ABS toets (Fluorescent Treponemal Teenliggaam Absorpsie Toets) vir sifilis is 'n voorbeeld van 'n indirekte fluoresserende teenliggaamprosedure. Hierdie is 'n toets bevestig vir sifilis aangesien dit spesifiek vir teenliggaampies in die pasiënt se serum gemaak in reaksie op die sifilis spirogeet, Treponema pallidum.

In hierdie toets, vermoor T. pallidum,(die bekende antigeen), word op 'n skyfie vasgemaak (sien Fig 4, stap 1). Die pasiënt se serum word by die skyfie gevoeg. As die pasiënt sifilis het, teenliggaampies teen die T. pallidum sal reageer met die antigeen op die skyfie (Fig. Die skyfie word dan gewas om enige teenliggaampies wat nie aan die spirogeet gebind is, te verwyder nie.

Om hierdie reaksie sigbaar te maak, word 'n tweede dier-afgeleide teenliggaampie wat teen menslike teenliggaampies gemaak is en gemerk met 'n fluoresserende kleurstof (fluoresserende anti-mens gammaglobulien) bygevoeg. Hierdie fluoresserende anti-HGG teenliggaampies reageer met die pasiënt se teenliggaampies wat gereageer het met die T. pallidum op die skyfie (Fig. 4, stap 3). Die skyfie word gewas om enige ongebonde fluoresserende anti-HGG teenliggaampies te verwyder en met 'n fluoresserende mikroskoop waargeneem. As die spirokete gloei of fluoresseer (sien Fig. 5), het die pasiënt teenliggaampies gemaak teen T. pallidum en het sifilis.

Flits-animasie van die FTA-ABS-toets vir sifilis.

http5-weergawe van animasie vir iPad wat die FTA-ABS-toets vir sifilis wys.

Nog 'n voorbeeld van die indirekte fluoresserende teenliggaampietoets is die toets vir teenliggaampies teen die maselsvirus. Geïnaktiveerde maselsvirus-geïnfekteerde selle (die bekende antigeen) word aan 'n mikroskoopskyfie vasgemaak. Die pasiënt se serum word dan bygevoeg. Indien die persoon masels het, sal teenliggaampies van die isotipe IgG teen die maselsvirus gemaak word en sal aan virale epitope op die bekende maselsvirus-geïnfekteerde selle bind. Nadat die skyfie gewas is om enige ongebonden IgG te verwyder, word fluoresserende antimenslike IgG bygevoeg. Die vloeibare antimenslike IgG bind dan aan die pasiënt se IgG wat aan die besmette selle gebind is. Wanneer dit met 'n fluoresserende mikroskoop gekyk word, sal die besmette selle groen fluoresseer.

e. Die EIA en Western Blot serologiese toetse vir teenliggaampies teen die Menslike Immuniteitsgebrekvirus (MIV)

In die geval van die huidige MIV-teenliggaampietoetse, die pasiënt se serum word gemeng met verskeie MIV-antigene wat deur rekombinante DNA-tegnologie geproduseer word. As die persoon seropositief is (het herhaalde positiewe antigeen-teenliggaamtoetse), dan moet MIV in daardie persoon se liggaam wees wat teenliggaamproduksie stimuleer. Met ander woorde, die persoon moet met MIV besmet wees. Die twee mees algemene toetse wat tans gebruik word om teenliggaampies teen MIV op te spoor, is die ensiem-immunotoets of EIA (ook bekend as die ensiem-gekoppelde immunosorbant-toets of ELISA) en die Western blot of WB. 'n Persoon word slegs as seropositief vir MIV-infeksie beskou nadat 'n OIE-siftingstoets herhaaldelik reaktief is en 'n ander toets soos die WB uitgevoer is om die resultate te bevestig.

Die OIE is goedkoper, vinniger en tegnies minder ingewikkeld as die WB en is die prosedure wat aanvanklik as 'n siftingstoets vir MIV-infeksie gedoen word. Die verskillende OIB-toetse gee 'n spektrofotometriese lesing van die hoeveelheid teenliggaampies wat aan bekende MIV-antigene bind.

Die OIE-toetsstel bevat plastiekputte waaraan verskeie MIV-antigene geadsorbeer is (sien Fig. 6, stap 1). Die pasiënt se serum word by die putte gevoeg en enige teenliggaampies teenwoordig in die serum teen MIV-antigene sal aan die ooreenstemmende antigene in die putte bind (Fig. 6, stap 2). Die putte word dan gewas om alle teenliggaampies in die serum te verwyder behalwe dié wat aan MIV-antigeene gebind is. Ensiem-gekoppelde anti-menslike gamma globulien (anti HGG) teenliggaampies word dan by die putte gevoeg. Hierdie teenliggaampies, wat in 'n ander dier gemaak word teen die Fc-gedeelte van menslike teenliggaampies deur die dier met menslike serum in te spuit, het 'n ensiem wat chemies geheg is. Hulle reageer met die menslike teenliggaampies wat aan die bekende MIV-antigene gebind is (Fig. 6, stap 3). Die putte word dan gewas om enige anti-HGG te verwyder wat nie aan serum teenliggaampies gebind het nie. A substraat spesifiek vir die ensiem word dan bygevoeg en die gevolglike ensiem-substraat reaksie veroorsaak a kleurverandering in die putte (Fig. 6, stap 4). As daar geen teenliggaampies in die pasiënt se serum teen MIV is nie, sal daar niks vir die ensiemgekoppelde anti-HGG wees om aan te bind nie en dit sal uit die putte gewas word. Wanneer die substraat bygevoeg word, sal daar geen ensiem in die putte teenwoordig wees om 'n kleurverandering te gee nie.

Flitsanimasie van die EIA-toets vir teenliggaampies teen MIV.

http5-weergawe van animasie vir iPad wat die EIA-toets vir teenliggaampies teen MIV wys.

As die aanvanklike OIB reaktief is, is dit outomaties herhaal om die moontlikheid te verminder dat tegniese laboratoriumfout die reaktiewe resultaat veroorsaak het. As die OIE steeds reaktief is, is dit dan bevestig deur die Western blot-toets.

Die Westerse klad WB is die toets wat die meeste gebruik word as 'n bevestigingstoets as die OIE herhaaldelik positief is. Die WB is tegnies meer kompleks om uit te voer en te interpreteer, is meer tydrowend en is duurder as die OIB's.

Met die WB word die verskillende proteïen- en glikoproteïenantigene van MIV geskei volgens hul molekulêre gewig deur gelelektroforese ('n prosedure wat gelaaide proteïene in 'n jel skei deur 'n elektriese veld toe te pas). Sodra dit geskei is, word die verskillende MIV-antigene na 'n nitrosellulosestrook oorgedra (sien Fig. 7, stap 1 en Fig. 7, stap 2). Die pasiënt se serum word dan met die strook geïnkubeer en enige MIV-teenliggaampies wat teenwoordig is, sal aan die ooreenstemmende bekende MIV-antigene op die strook bind (Fig. 7, stap 3). Ensiem-gekoppelde anti-menslike gamma globulien (anti HGG) teenliggaampies word dan by die strook gevoeg. 7, stap 4). Die strook word dan gewas om enige anti-HGG te verwyder wat nie aan serum teenliggaampies gebind het nie. A substraat spesifiek vir die ensiem word dan bygevoeg en die gevolglike ensiem-substraat reaksie veroorsaak a kleurverandering op die strook (Fig. 7, stap 5). As daar geen teenliggaampies in die pasiënt se serum teen MIV is nie, sal daar niks vir die ensiemgekoppelde anti-HGG wees om aan te bind nie en dit sal uit die strook gewas word. Wanneer die substraat bygevoeg word, sal daar geen ensiem op die strook teenwoordig wees om 'n kleurverandering te gee nie.

Flitsanimasie van die WB-toets vir teenliggaampies teen MIV.

http5-weergawe van animasie vir iPad wat die WB-toets vir teenliggaampies teen MIV wys.

Dit moet genoem word dat alle serologiese toetse in staat is om af en toe te gee vals-positiewe en vals-negatiewe resultate. Die mees algemene oorsaak van 'n vals-negatiewe MIV-teenliggaamtoets is wanneer 'n persoon is eers onlangs met MIV besmet en sy of haar liggaam het nog nie voldoende hoeveelhede teenliggaampies gemaak om 'n sigbare positiewe serologiese toets te gee nie. Dit neem gewoonlik tussen 2 weke en 3 maande nadat 'n persoon aanvanklik met MIV besmet is om na 'n positiewe MIV-teenliggaamtoets oor te skakel.

'n Aantal kommersiële vinnige MIV-toetse is ook verbeter om teenliggaampies teen MIV op te spoor. Hulle sluit in:

  • OraQuick Advance HIV1/2®: gebruik óf 'n vingerstok-bloedmonster óf 'n mondelinge monster.
  • Uni-Gold Recombigen®: gebruik óf 'n vingerstok óf volbloedmonster.
  • Reveal G2®: Gebruik serum of plasma.
  • Multispot HIV-1/MIV-2®: Gebruik serum of plasma.

Vir meer inligting oor MIV en VIGS, sien die volgende leervoorwerpe in jou lesinggids:

  • Eenheid 4, Afdeling IVF3: Die Lewensiklus van MIV

PROSEDURE

PROSEDURE VIR DIREKTE SEROLOGIESE TOETSE OM ONBEKENDE ANTIENE OP TE KEN

A. Serologiese Tik van Shigella

1. Gebruik 'n wasmerker en teken twee sirkels (ongeveer die grootte van 'n nikkel) op elk van twee skoon glasskyfies. Benoem die sirkels A, B, C en D.

2. Voeg by een druppel van die vermoed word Shigella(onbekende antigeen) aan elke sirkel. (Die Shigella is met formalien behandel om dit nie-aansteeklik, maar steeds antigenees te maak.)

3. Voeg nou by een druppel van bekende Shigella-subgroep A antiserum teen die "A" sirkel, een druppel van bekend Shigella subgroep B antiserum teen die "B" sirkel, een druppel van bekend Shigella subgroep C antiserum teen die "C" sirkel, en een druppel van bekend Shigella subgroep D antiserum teen die "D" sirkel.

4. Draai die skyfie versigtig vir 30-60 sekondes.

Agglutinasie van die bakterieë, dui op 'n positiewe reaksie.

Geen agglutinasie is negatief nie.

5. Gooi alle pipette en skyfies in die ontsmettingsmiddelhouer weg.

B. Serologiese tik van streptokokke: Die Clearview® Strep A Exact II peilstoktoets

1. Voeg by 4 druppels Ekstraksie Reagens #1 na die onttrekkingsbuis. Hierdie reagens bevat 2M natriumnitriet en moet pienk tot pers van kleur wees.

2. Voeg by 4 druppels Ekstraksie Reagens #2 na die onttrekkingsbuis. Hierdie reagens bevat 0,3M asynsuur. Die oplossing moet geel van kleur word.

3. Plaas die keel depper in die onttrekkingsbuis en rol dit met 'n sirkelbeweging binne-in die buis. Laat staan ​​vir ten minste 1 minuut.

4. Druk die depper stewig teen die onttrekkingsbuis om soveel vloeistof as moontlik uit die depper te verdryf en gooi die depper in die bioafvalhouer weg.

5. Dompel die toetsstrook in die ekstraksiebuis met die pyle wat na die onttrekte monsteroplossing wys. Laat die strook in die buis en begin tydsberekening.

6. Lees die resultate binne 5 minute. 'n Rooi band in die kontrolegebied en 'n rooi band in die toetsgebied dui op 'n positiewe toets (Sien Fig. 'n Enkele rooi band in die kontrolegebied dui slegs op 'n negatiewe toets (Sien Fig. 6D). Geen gekleurde band in die kontrolegebied dui op 'n ongeldige toets nie.

C. Serologiese toetse om swangerskap op te spoor: Die Alere hCG-peilstok®

1. Doop die hCG-peilstok in die urine tot by die maksimum lyn op die strook vir 5 sekondes.

2. Plaas die toetspeilstok op 'n plat, nie-absorberende oppervlak en lees die resultate na 3-4 minute. Moenie na die gepaste leestyd tolk nie.

3. As hCG teenwoordig is in die urine teen 'n konsentrasie van 25mlU/ml of meer, 'n positiewe toets, 'n pienk-tot-rooi toetslyn sal saam met 'n rooi kontrolelyn verskyn in die resultaatvenster (sien Fig. As hCG afwesig is of op baie lae vlakke teenwoordig is, 'n negatiewe toets, net 'n rooi kontrolelyn verskyn in die resultaatvenster (sien Fig. 7B4).

D. Die Direkte Fluorescerende Teenliggaampie Tegniek

Let op die demonstrasie van 'n positiewe direkte fluoresserende teenliggaampietoets vir Neisseria gonorrhoeae .

PROSEDURE VIR INDIREKTE SEROLOGIESE TOETSING OM TEGENLIGGAAMHEDE IN DIE PASIËNT SE SERUM OP TE KEN

A. Die RPR®-kaarttoets vir sifilis (demonstrasie)

1. Merk 6 proefbuise soos volg: 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 en 1:32.

2. Gebruik 'n 1,0 ml pipet en voeg by 0,5 ml 0,9% soutoplossing in buise 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 en 1:32.

3. Voeg by 0,5 ml van die pasiënt se serum na die 1:1 buis (onverdunde serum).

4. Voeg nog een by 0,5 ml serum na die soutoplossing in die 1:2 buis en meng. Verwyder 0,5 ml uit die 1:2-buis en voeg dit by die 1:4 buis en meng. Verwyder 0,5 ml uit die 1:4-buis, voeg by die 1:8 buis en meng. Verwyder 0,5 ml uit die 1:8-buis, voeg by die 1:16 buis en meng. Verwyder 0,5 ml uit die 1:16-buis, voeg by die 1:32 buis en meng. Verwyder 0,5 ml uit die 1:32-buis en weggooi. Die verdunning van die serum word in Fig. 8 opgesom.

5. Gebruik die kapillêre pipette wat by die kit voorsien is, voeg by 'n druppel van elke serumverdunning sirkels van die RPR-kaart te skei. Sprei die serum oor die hele binneoppervlak van die sirkel met die punt van die pipet, met 'n nuwe pipet vir elke serumverdunning.

6. Gebruik die RPR-antigeen-dispenser, voeg by 'n druppel bekende RPR-antigeen aan elke sirkel. Moenie dat die naald van die dispenser aan die serum raak nie. Gebruik weggooibare roerders en meng die bekende RPR-antigeen met die serum in elke sirkel.

7. Plaas die skyfie op 'n skudder en draai vir 'n maksimum van 4 minute.

8. Lees die resultate soos volg:

  • 'n Definitiewe saamklontering van die houtskooldeeltjies word gerapporteer as reaktief (R).
  • Geen klontering word as aangemeld nie nie-reaktief (N).

Die grootste serumverdunning wat 'n reaktief resultaat is die titer. Byvoorbeeld, as die verdunnings soos volg uitgedraai het, sal die titer as 1:4 of 4 dils gerapporteer word.

1:11:21:41:81:161:32

R

R

R

N

N

N

B. Die serologiese toetse vir aansteeklike mononukleose (demonstrasie)

1. Plaas een druppel van elk van die pasiënt se serum in sirkels op die toetsskyfie.

2. Voeg by een druppel van die behandelde latexdeeltjies wat Paul-Bunnell-antigene op hul oppervlak bevat (die bekende antigeen) aan elke sirkel en meng met weggooibare toedienstokkies.

3. Wikkel die kaart saggies vir 3 minute,en let op vir agglutinasie van die latexdeeltjies. Agglutinasie dui op die teenwoordigheid van heterofiele teenliggaampies (sien Fig. 2).

C. Die serologiese toetse vir sistemiese lupus erythematosus (SLE) (demonstrasie)

1. Voeg by een druppel van elk van die pasiënt se serum om sirkels op die toetsskyfie te skei.

2. Voeg by een druppel van die Latex-Deoksiribonukleoproteïenreagens (die bekende antigeen, deoksiribonukleoproteïen geadsorbeer aan latexdeeltjies) aan elke serummonster en meng met weggooibare toedienerstokkies.

3. Skuif die glybaan saggies vir 3 minute en kyk vir agglutinasie van die latexdeeltjies. Agglutinasie dui op die teenwoordigheid van antinukleêre teenliggaampies geassosieer met SLE (sien Fig. 3).

D. Die FTA-ABS Toets vir Sifilis (Indirekte Fluorescerende Teenliggaampie Tegniek

Neem die 35 mm-skyfie van 'n positiewe FTA-ABS-toets waar (sien Fig. 5).

E. Die OIE- en WB-toetse vir MIV-teenliggaampies

Let op die illustrasies van die OIE en die WB-toetse vir teenliggaampies teen MIV.

RESULTATE

RESULTATE VIR DIREKTE SEROLOGIESE TOETSE OM ONBEKENDE ANTIENE OP TE KEN

A. Serologiese Tik van Shigella

Maak 'n tekening van jou resultate.

  • Agglutinasie van bakterieë is positief.
  • Geen agglutinasie van bakterieë is negatief nie.

Shigella tik skyfie

B. Serologiese tipering van streptokokke: Clearview® Strep A Exact II-peilstok

Maak 'n tekening van jou resultate.

C. Serologiese toetse om swangerskap te diagnoseer: Alere® hCG-peilstok

Maak 'n tekening van 'n positiewe toets vir swangerskap.

D. Die Direkte Fluorescerende Teenliggaampie Tegniek

Maak 'n tekening en beskryf 'n positiewe direkte fluoresserende teenliggaamtoets.

Positiewe direkte fluoresserende teenliggaampie toets
vir Neisseria gonorrhoeae

RESULTATE VIR INDIREKTE SEROLOGIESE TOETSE OM TEGENLIGGAAMHEDE IN DIE PASIËNT SE SERUM OP TE KEN

A. RPR Card®-toets vir sifilis (kwantitatief)

Bespeur nietreponemale antilipied-teenliggaampies (reagin)

Teken jou resultate in die tabel aan.

VerdunningResultaat
1:1
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
Titer

R = reaktief (afsonderlike klompe)
N = nie-reaktief (geen klonte)

B. MONO-TOETS vir aansteeklike mononukleose (kwalitatief)

Bespeur heterofiele teenliggaampies.

Teken die resultate van 'n positiewe en 'n negatiewe toets.

Aansteeklike mononukleose toetsskyfie
+ = Agglutinasie van latexdeeltjies
- = Geen agglutinasie van latexdeeltjies nie

C. Serologiese toets vir SLE (kwalitatief)

Bespeur anti-deoksiribonukleoproteïen teenliggaampies.

Teken die resultate van 'n positiewe en 'n negatiewe toets.

SLE toetsskyfie
+ = Agglutinasie
- = Geen agglutinasie nie

D. FTA-ABS-toets vir sifilis (bevestig)

Bespeur teenliggaampies teen Treponema pallidum

Teken die resultate van 'n positiewe FTA-ABS-toets.

Positiewe FTA-ABS toets vir sifilis
(fluoresserende spirochetes)


Lab 17: Serologie, Direkte en Indirekte Serologiese Toetsing - Biologie

Oor die afgelope paar jaar het intraveneuse IgG (IVIgG) groot belang verkry in die behandeling van immuniteitsgebrektoestande en outo-immuunafwykings, in die profilakse van Rh-iso-immunisasie, en in die profilakse van beenmurgoorplantingspasiënte om infeksies te verminder (1-3). Dit is egter belangrik om te besef dat daar kliniese laboratoriumtoetsprobleme is wat verband hou met die gebruik van IVIgG. Hierdie probleme sluit in dié wat veroorsaak word deur virale en rooibloedselle (RBC) allo-teenliggaampkontaminasie van IVIgG-preparate (Tabel 1).

Tabel 1. Teenliggaampies wat teenwoordig mag wees in IVIgG-voorbereidings
TetanusAnti-A en anti-B
MaselsAnti-A
Hepatitis B kernAnti-B
SitomegalovirusAnti-D
Hepatitis aAnti-K
Hepatitis B oppervlak antigeenTeenliggaampies (teenliggaampies) wat reageer met alle RBC getoets
Hepatitis CPlaatjie teenliggaampies (?)
Baie ander teenliggaampies teen bakterieë, virus, ens.Limfositotoksiese teenliggaampies (?)

Voorbereidings van IVIgG word onttrek uit groot poele vrywillige plasmaskenkers (meer as 10 000 skenkers/poel) onder streng Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA) regulasies en Wêreldgesondheidsorganisasie (WGO) se standaarde en riglyne. IVIgG word onttrek deur 'n proses van koue alkohol fraksionering die finale produk het 96-98% van die elektroforetiese eienskappe van gammaglobulien. Vervaardigers voeg verskeie hoeveelhede biochemiese verbindings by om isotonisiteit, spesifieke pH-reekse, stabiliteit en oplosbaarheid (4-16) te bereik. IVIgG bevat ook veranderlike hoeveelhede IgA (van 0,4 tot 720 mg/ml, afhangend van die vervaardiger). Dit is belangrik om in gedagte te hou wanneer pasiënte behandel word wat 'n IgA-tekort kan hê (3).

Na infusie word IVIgG byna onmiddellik in die sirkulasie beskikbaar. Daar word beraam dat na 6 d, die ekstravaskulêre en intravaskulêre kompartementkonsentrasies van IVIgG gelyk is. Alhoewel die fisiologiese halfleeftyd van IVIgG ongeveer 22 dae is, is waargeneem dat dit tot meer as 30 dae strek by pasiënte met immuungebrek (13). Weereens, IVIgG wat deur verskillende vervaardigers voorberei word, moet voldoen aan streng WGO- en FDA-riglyne, produksiestandaarde en kwaliteitskontroles, wat insluit die verwagte minimum vlakke van teenliggaampies teen hepatitis B-oppervlakantigeen (HBsAg) en hepatitis A-virus (4).

IVIgG-preparate bevat die verskillende IgG-subklasse in verhoudings soortgelyk aan dié in normale plasma. Die belangrikheid van die IgG-subklasse in vervangingsterapie is beduidend, aangesien baie siekte- en infeksieprosesse blykbaar geassosieer word met tekorte in spesifieke IgG-subklasse (17-23). IVIgG-preparate afkomstig van die groot plasmaskenkerpoele wat hierbo beskryf word, bevat egter ook 'n breë spektrum van teenliggaampies teen virale, bakteriese en ander mikroörganismes. Daarbenewens bevat hulle onvermydelik teenliggaampies teen RBC-antigene, wat vals-positiewe resultate kan lewer tydens die opwerking van transfusie-afhanklike pasiënte (24) (Tabel 1).

Gevolglik is die teenwoordigheid van allo-teenliggaampies in IVIgG-preparate 'n bekommernis vanweë die verwoesting wat dit kan aanrig op serologiese en verenigbaarheidstoetsresultate. Een van die mees ooglopende bekommernisse is besmetting met teenliggaampies teen menslike immuniteitsgebrekvirus (MIV) en hepatitis C-virus. Ons hier by M. D. Anderson Kankersentrum se Transfusiediens het onlangs IVIgG-preparate bestudeer wat deur ons diens gebruik word. In 'n studie wat in 1991 gerapporteer is, het ons 165 lotte IVIgG van verskillende vervaardigers getoets (24) (Tabel 2). In 'n meer onlangse studie het ons 51 baie IVIgG (ongepubliseerde data) ontleed. Bepaalde afnames in kontaminasievlakke kon gesien word wanneer ons twee stelle data vergelyk word. Byvoorbeeld, anders as die vroeëre lotte, was nie een van die huidige lotte reaktief teen menslike immuniteitsgebreksvirus 1/2 (MIV-1/2) of vinnige plasma-herwinning nie. Sewe-en-veertig van die lotte in die meer onlangse studie was reaktief vir hepatitis C-teenliggaampies, maar in die toekoms verwag ons om minder hepatitis C-reaktiwiteit te sien in die lig van 'n nuwe FDA-vereiste vir skenkersifting en plasmaverwerking. Dit is dan belangrik om nie oor te sien of te oorreageer op hepatitis C-teenliggaamreaktiwiteit by 'n pasiënt wat IVIgG ontvang nie. Dit is duidelik dat toetsing vir hepatitis en sitomegalovirus (CMV) ook oninterpreteerbare resultate kan lewer.

Tabel 2. Gedeeltelike lys van teenliggaampies vir aansteeklike siektemerkers getoets vir en geïdentifiseer in verskillende IVIgG-lotte
Nee baie positief
1986-1990
(n=165)
1991-1992
(n=51)
Hepatitis B oppervlak165100%51100%
Hepatitis B kern16097%2141%
Sitomegalovirus15896%51100%
Hepatitis A totaal165100%Nie getoets nie
MIV-16439%Nie getoets nie
MIV-1/2Nie getoets nie00%
Vinnige plasma herstel4820%00%
Hepatitis CNie getoets nie4792%

Nog 'n bekommernis, veral by beenmurgoorplantingspasiënte, is die teenwoordigheid van RBC allo-teenliggaampies (Tabelle 3 en 4). Sedert die onlangse bekendstelling van IVIgG vir CMV-profilakse by beenmurgoorplantings ontvangers, het 'n aantal verslae verhoogde voorkoms van positiewe direkte en indirekte antiglobulientoetse, verwarrende serologiese resultate in vooroortappingstoetse en seldsame gevalle van hemolise beskryf (25-29). In 'n studie deur Robertson et al. van die serologiese bevindings in 47 beenmurgoorplantingspasiënte wat hoë dosisse IVIgG ontvang het (25), was die frekwensie van positiewe direkte antiglobulienresultate 48.9% (P minder as 0.001) teenoor 12.8% vir 'n kontrolegroep wat nie IVIgG ontvang het nie. Die frekwensie van positiewe indirekte antiglobulientoetsresultate was 25.5% (P minder as 0.001) in die IVIgG-groep teenoor 4.3% in die nie-IVIgG-groep. Die mees gereelde geïdentifiseerde teenliggaamspesifisiteite in die serum en die eluaat was anti-A of anti-B, gevolg deur anti-D en anti-K. In 'n toets van 46 lotte IVIgG vir teenliggaampies teen bloedgroepantigene deur Garcia et al. (26), anti-A of anti-B is in 88% van die lotte opgespoor, en indirekte anti-mensglobulien is in 63% van die lotte bespeur. Omdat IVIgG-preparate, soos ons uitgewys het, vervaardig word uit groot skenkerplasmapoele, kan hulle verskillende hoeveelhede isoagglutiniene en ander algemene allo-teenliggaampies soos anti-D en anti-K bevat (5,30). Die gerapporteerde titers van isoagglutiniene of anti-D in IVIgG-preparate wissel van 0 tot 128 (5,31,32) (Tabel 5).

Tabel 3. Isohemagglutiniene in IVIgG-lotte
Nee baie positief
1986-1990
(n=165)
1991-1992
(n=49)*
Anti-A en anti-B11771%2959%
Anti-A2012%1327%
Anti-B85%48%
Geen isomagglutinien nie2012%36%

*Twee lotte van 51 nie getoets nie.

Tabel 4. RBC-allo-teenliggaampies in IVIgG-lotte
Nee baie
1986-1990
(n=165)
1991-1992
(n=47)*
Geen bewyse van RBC allo-teenliggaampies nie8451%817%
RBC allo-teenliggaampies teenwoordig8149%3983%

*Vier lotte van 51 nie getoets nie.

Tabel 5. RBC-allo-teenliggaampies getoets vir en geïdentifiseer in IVIgG-lotte, 1986-1990 en 1991-1992
Nee baie positief
1986-1990
(n=81)
1991-1992
(n=39)
Anti-D3847%923%
Anti-K22%13%
Anti-CGeen data13%
Anti-K, anti-D en anti-LebGeen data13%
Anti-K, anti-D, anti-Leb en anti-CGeen data13%
Anti-C en anti-DGeen data13%
OnidentifiseerbaarGeen data718%
Anti-K en onidentifiseerbaarGeen data25%
Anti-D en anti-K22%615%
Anti-D en onidentifiseerbaar1215%821%
Anti-D, anti-K, en onidentifiseerbaarGeen data1231%
Met spesifieke RBC allo-teenliggaampies4859%Geen data
Reaktief met alle selle wat getoets is2835%Geen data
Onidentifiseerbare RBC allo-teenliggaampies1316%Geen data

Benewens IVIgG, kan ander terapeutiese immuunonderdrukkende middels wat soortgelyke effekte aan dié van IVIgG het en in beenmurgoorplantingspasiënte gebruik word, soos anti-limfosietglobulien en anti-timosietglobulien, probleme veroorsaak tydens verenigbaarheidstoetsing. Byvoorbeeld, in 'n reeks van 37 pasiënte wat deur Swanson et al. bestudeer is, het 8 positiewe direkte antiglobulientoetse en positiewe RBC-teenliggaampies gehad, 15 het RBC-teenliggaampies ontwikkel wat by kamertemperatuur opgespoor kan word, 4 het RBC-teenliggaampies ontwikkel wat by 37 grade Celsisus in albumien opgespoor kan word, en 33 het RBC-teenliggaampies ontwikkel wat in die anti-mensglobulienfase opgespoor kan word (33). Die verenigbaarheidsprobleme is opgelos deur die anti-mensglobulien te adsorbeer met RBC's bedek met anti-limfosietglobulien, wat toegelaat het dat die stof in die anti-limfosietglobulien wat met die anti-mensglobulien reageer, verwyder word.

Hemolitiese episodes wat voortspruit uit passief verkry IgG-teenliggaampies is nog 'n probleem in IVIgG-toediening, hoewel sulke episodes gewoonlik lig en selfbeperkend is. Byvoorbeeld, Robertson et al., In hul studie van 47 beenmurgoorplantings ontvangers na IVIgG-terapie, het geen beduidende hemolise waargeneem wat verband hou met passiewe oordrag van teenliggaampies nie (25). Aan die ander kant, 'n onlangse verslag deur Copelan et al. beskryf twee pasiënte wat klinies beduidende hemolise gehad het nadat hulle groot dosisse IVIgG ontvang het (27). Een van hierdie twee pasiënte het 'n akute episode van hemolise gehad nadat hulle twee lotte IVIgG ontvang het. Anti-A en anti-D is in die pasiënt se RBC-eluaat gevind en anti-A en anti-D titers van onderskeidelik 32 en 2 is in die IVIgG-lotte gedemonstreer. Alhoewel daar aanvaar is dat lae titers van teenliggaampies in IVIgG-preparate nie klinies beduidende hemolise by pasiënte veroorsaak nie (32), het die twee gevalleverslae deur Copelan et al. illustreer seldsame uitsonderings (27).

Isomagglutiniene vorm 'n ander probleem. Ons en ander het voorheen berig oor die nie onverwagte teenwoordigheid van isohemagglutiniene in IVIgG-preparate (24,34). Die teenwoordigheid van hierdie teenliggaampies plaas egter 'n groot las op die logistiek van die bloedtoevoer, veral in die geval van IVIgG-afhanklike pasiënte. Indien sulke pasiënte ook oortappingsafhanklik is, moet hulle in die meeste gevalle O, Rh-bloed gegee word. In hierdie verband sal dit dan baie nuttig en logies wees vir die vervaardigers van IVIgG-preparate om hierdie teenliggaampies uit te adsorbeer. Alhoewel die tegnologie om dit te doen beskikbaar is, word sulke teenliggaampies volgens die vervaardigers se verteenwoordigers blykbaar nie deur die FDA vereis nie.

Dit is interessant om daarop te let dat in ons 1991-studie, ongeveer 50% van die IVIgG-preparate geen bewyse van RBC-allo-teenliggaampies getoon het nie (24). In ons meer onlangse oorsig was egter slegs 17% van die IVIgG-preparate vry van sulke teenliggaampies. Die rede hiervoor is vir ons nog onduidelik.

Die lys van RBC allo-teenliggaampies wat hier bespreek word, is nie volledig nie en verteenwoordig slegs die omvang van ons toetsing. Tog, al die allo-teenliggaampies wat ons bespreek het, vertroebel die immunohematologiese prentjie en strem verder die proses om 'n veilige toevoer van bloedkomponente vir transfusie-afhanklike pasiënte te verseker (Tabelle 4-6).

Tabel 6. Impak van IVIgG op die Kliniese Laboratorium en die Transfusiediens
Pasiënte op IVIgG kan vals-positief toets in IgG-gebaseerde toetse.
Transfusiediens word gedwing om uitgebreide metodes te gebruik om RBC allo-teenliggaampies te identifiseer.
Transfusie-afhanklike pasiënte op IVIgG put die O, Rh-negatiewe bloedvoorraad uit.

Ons meer onlangse ontleding van IVIgG-lotte het getoon dat ander teenliggaampies, soos anti-C, anti-c en anti-Leb, ook die opwerking en ondersteuning van pasiënte wat gelyktydig afhanklik is van IVIgG-terapie en oortappings bemoeilik. Om so 'n situasie doeltreffend te hanteer, moet 'n hospitaal se oortappingsdiens bewus wees van pasiënte wat IVIgG ontvang.In hospitale waarin die apteek IVIgG resepteer, is dit nie so maklik nie, inligtingskakels moet tussen die apteek en die oortappingsdiens gevestig word om die name van elke pasiënt wat IVIgG ontvang, die IVIgG-dosis, die lotnommer en die datum van infusie te verskaf. In ander instellings waarin die oortappingsdiens self IVIgG uitdeel, is dit egter baie maklik en gerieflik vir die diens om tred te hou met wie dit kry.

By ons inrigting word leë IVIgG-bottels deur die apteek gestoor en onmiddellik by die oortappingsdiens afgelewer elke keer wanneer 'n pasiënt 'n IVIgG-infusie ontvang. Ons oortappingsdiens teken dan die lotnommer en datum van infusie van IVIgG in die pasiënt se lêer aan. Die oortappingsdiens is ook gewoonlik in staat om genoeg IVIgG uit die leë flessies te haal om die lotte vir die teenwoordigheid van RBC allo-teenliggaampies te skerm. Wanneer 'n versoek om oortapping vir enige pasiënt op rekord ontvang word, kan 'n vinnige kruiskontrole van die oortappinglêer deur die oortappingdienspersoneel hulle attent maak op potensiële serologiese probleme. Dikwels lyk die teenliggaamprofiele wat in die lote IVIgG opgespoor word, soos dié wat gevind word in die serum en eluaat van pasiënte wat IVIgG ontvang. Daarom moet die oortappingdiens die bloedserum-teenliggaampieprofiele van alle oorplantingspasiënte deeglik ondersoek om te bepaal watter tipe IVIgG-oplossings toegedien moet word. Hierdie stappe is waardevol om komplekse serologiese probleme op te los.

Onvermydelik moet die kliniese laboratorium metodes en prosedures daarstel om vals-positiewe slaggate wat veroorsaak word deur IVIgG-infusies te vermy. Aan die ander kant moet die oortappingsdiens inligting soek oor pasiënte wat IVIgG-terapie ontvang sodat toepaslike hemoterapeutiese skemas betyds verskaf kan word. Gevolglik moet die kliniese laboratorium en die oortappingsdiens albei in die inligtingslus wees rakende pasiënte wat IVIgG ontvang. Verder moet elke IVIgG-lot wat gebruik word, ontleed word om vas te stel watter kontaminerende teenliggaampies teenwoordig kan wees en kan vals laboratoriumtoetsresultate lewer, resultate wat op hul beurt ongeregverdigde kliniese spekulasie kan veroorsaak en die bestel van bykomende maar onnodige terapeutiese en diagnostiese prosedures.

In die hantering van IVIgG moet die kliniese laboratorium, apteek, oortappingsdiens, behandelende geneesheer en verpleegpersoneel almal oop kanale van kommunikasie en inligting hê om onnodige toetsing en opwerkings by sulke pasiënte te voorkom. Soos hierbo genoem, moet daardie kliniese en oortappingspersoneel wat met IgA-tekort pasiënte te doen het veral bedag wees wanneer IVIgG-preparate gebruik word, aangesien sulke preparate verskillende hoeveelhede IgA kan bevat en aangesien die infusie van IVIgG in 'n IgA-tekort pasiënt met IgA-teenliggaampies kan ontketen. 'n ernstige anafilaktiese reaksie.

Nog 'n opmerking van versigtigheid hou verband met allergiese oortappingsreaksies wat tydens of na 'n posttransfusie IVIgG-infusie kan ontstaan. Dit kan gebeur dat 'n verpleegpersoneel die infusie van IVIgG in sulke gevalle sal miskyk en slegs rapporteer dat die betrokke pasiënt een of ander tipe oortapping ontvang het. Alhoewel die oortappingsreaksie nie oor die hoof gesien moet word nie, sal die wete dat IVIgG toegedien is duidelik help om die allergiese reaksie te verstaan.

Sonder twyfel is IVIgG-terapie 'n modaliteit wat voortdurend uitbrei. Pasiënte wat dit ontvang ervaar wel voordelige effekte, en die lys van siekte-entiteite waarin IVIgG beproef en toegedien kan word, is tans onbeperk. In die lig hiervan moet die kliniese laboratorium en transfusiediens 'n proaktiewe strategie ontwikkel om die toetsinterferensies wat deur IVIgG-infusies veroorsaak word, te hanteer.

  1. Stiehm ER, Ashida E, Kim KS, et al. Binneaarse immunoglobuliene as terapeutiese middels. Ann Intern Med 207:367-382, 1987.
  2. Buckly RH, Schiff RI. Die gebruik van intraveneuse immunoglobulien in immuniteitsgebreksiektes. N Engl J Med 325:110-117, 1991.
  3. Nuweland AC. Kliniese gebruik van intraveneuse immunoglobulien in bloedafwykings. Blood Rev 2:157-167, 1988.
  4. Gardi A. Gehaltebeheer in die produksie van 'n immunoglobulien vir binneaarse gebruik. Blut 48:337-344, 1984.
  5. Romer J, Morgenthaler JJ, Scherz R, et al. Karakterisering van verskeie immunoglobulienpreparate vir binneaarse toediening: I. Proteïensamestelling en teenliggaaminhoud. Vox Sang 42:62-73, 1982.
  6. Romer J, Spath PJ, Skvaril F, et al. Karakterisering van verskeie immunoglobulienpreparate vir binneaarse toediening: II. Komplementaktivering en binding aan Staphylococcus proteïen A. Vox Sang 42:74-80, 1982.
  7. Romer J, Spath PJ. Molekulêre samestelling van immunoglobulienpreparate en die verband daarvan met komplementaktivering. In Nydegger UE (red), Immunohemotherapy: A Guide to Immunoglobulien Prophylaxis and Therapy. London, Academic Press, 1981, p. 123.
  8. Skvaril F, Roth-Wicky B, Barandum S. IgG-subklasse in menslike gamma-globulienpreparate vir binneaarse gebruik en hul reaktiwiteit met Staphylococcus proteïen A. Vox Sang 38:147, 1980.
  9. Skvaril F. Kwalitatiewe en kwantitatiewe aspekte van IgG subklasse in i.v. immunoglobulien preparate. In Nydegger UE (red), Immunohemotherapy: A Guide to Immunoglobulien Prophylaxis and Therapy. London, Academic Press, 1981, p. 113.
  10. Skvaril F, Barandun S. In vitro karakterisering van immunoglobuliene vir binneaarse gebruik. In Alving BM, Finlayson JS (eds), Immunoglobuliene: Kenmerke en gebruike van binneaarse preparate, DHHS-publikasienommer (FDA)-80-9005. Amerikaanse regeringsdrukkery, 1980, pp. 201-206.
  11. Burckhardt JJ, Gardi A, Oxelius V, et al. Immunoglobulien G subklas verspreiding in drie menslike binneaarse immunoglobulien preparate. Vox Sang 57:10-14, 1989.
  12. Morell A, Skvaril F. Stuktuur en biologiese eienskappe van immunoglobuliene en gamma-globulien-praparaten: II. Eienskappe van gamma-globulien-praparaten. Schweiz Med Wochenschr 110:80, 1980.
  13. Morell A, Schurch B, Ryser D, et al. In vivo gedrag van gamma globulien preparate. Vox Sang 38:272, 1980.
  14. Imbach P, Barandun S, d'Apuzzo V, et al. Hoë dosis intraveneuse gammaglobulien vir idiopatiese trombositopeniese purpura in die kinderjare. Lancet 1:1228, 1981.
  15. Barandun S, Morell A, Skvaril F. Kliniese ervarings met immunoglobulien vir binneaarse gebruik. In Alving BM, Finlayson JS (reds), Immunoglobuliene: Kenmerke en gebruike van binneaarse preparate. DHHS-publikasienommer (FDA)-80-9005. Amerikaanse regeringsdrukkery, 1980, pp. 31-35.
  16. Barandun S, Morell A. Nadelige reaksies op immunoglobulienpreparate. In Nydegger UE (red), Immunohemotherapy: A Guide to Immunoglobulien Prophylaxis and Therapy. London, Academic Press, 1981, p. 223.
  17. Heiner DC. Belangrikheid van immunoglobulien G subklasse. Am J Med 76:1-5, 1984.
  18. Skvaril F. Kliniese relevansie van IgG-subklasse. In Morell A, Nydegger UE (eds), Kliniese gebruik van binneaarse immunoglobuliene. London, Academic Press, 1986, pp. 37-45.
  19. Ochs HD, Wedgwood RJ. IgG subklastekorte. Annu Rev Med 38:325-340, 1987.
  20. Schur PH. IgG subklasse: 'n resensie. Ann Allergy 58:89-99, 1987.
  21. Berger M. Immunoglobulien G-subklasbepaling in diagnose en bestuur van teenliggaampekortsindrome. J Pediatr 110:325-328, 1987.
  22. Skvaril F, Gardi A. Verskille tussen beskikbare immunoglobulienpreparate vir binneaarse gebruik. Pediatr Infect Dis J 7:S43-S48, 1988.
  23. Copelan EA, Avalos BR, Kapoor N, et al. Alternatiewe toedienings van immunoglobulien na beenmurgoorplanting. Semin Hematol 29:96-99, 1992.
  24. Lichtiger B, Rogge K. Onwaarskynlike serologiese toetsresultate by pasiënte wat infusies van binneaarse immuun-gammaglobulien ontvang. Arch Pathol Lab Med 115:467-469, 1991.
  25. Robertson VM, Dickson IG, Romond EH. Positiewe antiglobulientoets as gevolg van intraveneuse immunoglobulien by pasiënte wat beenmurgoorplantings ontvang het. Transfusie 27:28-31, 1987.
  26. Garcia L, Huh YO, Fischer HE. Positiewe immunohematologiese en serologiese toetsresultate as gevolg van hoë dosis intraveneuse immunoglobulientoediening (letter). Transfusion 27:503, 1987.
  27. Copelan EA, Strohm PL, Kennedy MS. Hemolise na binneaarse immuunglobulienterapie. Transfusion 26:410-412, 1986.
  28. Steiner EA, Butch SH, Carey JL, et al. Passiewe anti-D van binneaarse immuunserumglobulien (letter). Transfusion 23:363, 1983.
  29. Whitsett CF, Pierce JA, Daffin LE. Positiewe direkte antiglobulientoetse wat verband hou met intraveneuse gammaglobuliengebruik by beenmurgoorplantings ontvangers. Transplantation 41:663-664, 1986.
  30. Goeie RA (red). Binneaarse immuunglobulien en die gekompromitteerde gasheer: Verrigtinge van 'n simposium. Am J Med 716(3A), 1984.
  31. Gordon JM, Cohen P, Finlayson JS. Vlakke van anti-A en anti-B in kommersiële immuunglobulien. Transfusie 20:90-92, 1980.
  32. Hoppe I. Teenliggaampiesifting van kommersiële immunoglobulienpreparate, eritrosiete, HLA en outo-teenliggaampies. Blut 39:9, 1979.
  33. Swanson JL, Issitt CH, Mann EW, et al. Oplossing van rooisel-versoenbaarheidstoetsprobleme by pasiënte wat anti-limfoblaste of anti-timosietglobulien ontvang. Transfusion 24:141-147, 1984.
  34. Lang GE, Veldhuis B. Immuunserumglobulien--'n oorsaak vir anti-Rh(D) passiewe sensitisering. Am J Clin Pathol 60:205-207, 1973.

HUIDIGE KWESSIES IN TRANSFUSIE-GENEESKUNDE
Volume 3, Nommer 2
Kopiereg 1995 Die Universiteit van Texas M. D. Anderson Cancer Center, Houston, Texas


GESKIEDENIS

Wassermann-toets of Wassermann-reaksie

Dit was die eerste bloedtoets vir sifilis en die eerste toets in die kategorie nietreponemale toetse (NTT) wat in 1906 deur Wassermann, Julius Citron en Albert Neisser ontwikkel is.

Dit is gebaseer op Komplementfiksasie-beginsel waarin 'n monster van bloed of CSF geneem is en ingebring is aan die antigeen wat kardiolipien was wat uit beespier of hart onttrek is. Treponemal nie-spesifieke teenliggaampies reageer met die lipied – die Wassermann-reaksie (WR) van antifosfolipied-teenliggaampies (APA's)

Die intensiteit van die reaksie (geklassifiseer 1, 2, 3 of 4) dui die erns van die toestand aan

Nuwer NTT's, soos die vinnige plasma-herwinning (RPR) en VDRL-toetse, het dit meestal vervang.


Uitvoerende Opsomming en Agtergrond

Uitvoerende Opsomming

Serologiese toetse vir ernstige akute respiratoriese sindroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is nou wyd beskikbaar. Anders as nukleïensuur-amplifikasietoetse (NAAT) wat virale RNA opspoor, meet teenliggaam-gebaseerde toetse die gasheer se humorale immuunrespons op huidige of vorige infeksie. Anti-SARS-CoV-2-teenliggaampies word tipies meer as twee weke na die aanvang van simptome waarneembaar (Figuur 1). As gevolg hiervan het SARS-CoV-2-serologie nie genoeg sensitiwiteit nie om die diagnose van koronavirussiekte 2019 (COVID-19) met selfvertroue uit te sluit wanneer teenliggaampies nie in die akute fase van siekte opgespoor word nie. NAAT bly die diagnostiese modaliteit van keuse vir akute infeksie. Teenliggaamtoetsing kan egter nuttig wees as 'n aanvulling tot NAAT op latere tye na infeksie. Oor die algemeen is IgM-toetse geneig om laer sensitiwiteit te hê om vorige infeksie op te spoor as IgG- of totale teenliggaampietoetse. Toetse wat ontwerp is om IgM en IgG in kombinasie op te spoor en te onderskei, waar die opsporing van óf IgM óf IgG gebruik word om 'n positiewe toetsresultaat te definieer, en IgA-toetse is geneig om laer spesifisiteit te hê om vorige infeksie op te spoor in vergelyking met slegs IgG of totale teenliggaampietoetse. Toetsspesifisiteit is veral belangrik vir groot serosurveillance-studies wanneer die voorkoms van vorige infeksie in die gemeenskap na verwagting laag sal wees. Om van waarde te wees, moet anti-SARS-CoV-2-teenliggaampietoetse hoë kliniese sensitiwiteit en spesifisiteit hê (d.w.s. > 99.5%).

Benewens gebruik in epidemiologiese studies, het die paneel twee kliniese scenario's geïdentifiseer waar teenliggaamtoetsing potensiële bruikbaarheid vir diagnose het. Serologiese toetse kan nuttig wees in die evaluering van individuele pasiënte met 'n hoë kliniese vermoede vir COVID-19 wanneer die resultate van molekulêre diagnostiese toetse herhaaldelik negatief is of sulke toetse nie uitgevoer is nie. Die sensitiwiteit en spesifisiteit van IgG en totale teenliggaampies is optimaal drie tot vier weke na die aanvang van simptome. Op die oomblik bestaan ​​daar min data in die vyfde week na-simptomaanvang om serologiese toetsprestasie op latere tydperke na infeksie te beoordeel. Opsporing van anti-SARS-CoV-2-teenliggaampies is ook nuttig vir assesserings van vermoedelike multisisteem-inflammatoriese sindroom by kinders. Vir simptomatiese pasiënte vereis die interpretasie van optimale serologieresultate noukeurige bepaling van die tydsberekening van toetsing relatief tot simptoomaanvang gekombineer met assesserings van die erns van die siekte. Gebaseer op die beskikbare bewyse op hierdie tydstip, moet serologiese toetse nie gebruik word om immuniteit of risiko van her-infeksie te bepaal nie. Dus, anti-SARS-CoV-2-teenliggaampopsporing kan nie besluite inlig om fisiese afstand te staak of die gebruik van persoonlike beskermende toerusting te verminder nie.

Hieronder is spesifieke aanbevelings en opmerkings wat verband hou met die gebruik van SARS-CoV-2 serologiese toetse in kliniese praktyk en openbare gesondheid opgesom. 'n Gedetailleerde beskrywing van agtergrond, metodes, bewysopsomming en rasionale wat elke aanbeveling ondersteun, kan aanlyn in die volledige teks gevind word.

Aanbevelings

  • Aanbeveling 1:Die IDSA-paneel stel voor om serologiese toetse te gebruik om SARS-CoV-2-infeksie te diagnoseer gedurende die eerste twee weke (14 dae) na simptoomaanvang (voorwaardelike aanbeveling, baie lae sekerheid van bewyse).
  • Aanbeveling 2:Wanneer SARS-CoV-2-infeksie laboratoriumbevestiging vir kliniese of epidemiologiese doeleindes vereis, thy IDSA-paneelstel voor tbepaling vir SARS-CoV-2 IgG of totale teenliggaampie drie tot vier weke na simptoomaanvang om bewyse van vorige SARS-CoV-2-infeksie op te spoor (voorwaardelike aanbeveling, baie lae bewyssekerheid).
    • Opmerking &ndash Wanneer serologie oorweeg word as 'n aanvulling tot NAAT vir diagnose, maksimeer die toetsing van drie tot vier weke na die aanvang van simptome die sensitiwiteit en spesifisiteit om vorige infeksie op te spoor.
    • Opmerking &ndash Serosurveillance-studies moet toetse met hoë spesifisiteit (d.w.s. > 99.5%) gebruik, veral wanneer die voorkoms van SARS-CoV-2 in die gemeenskap na verwagting laag sal wees.
    • Opmerking &ndash IgM- of IgG-kombinasietoetse is dié waar die opsporing van een van die teenliggaampies gebruik word om 'n positiewe resultaat te definieer.
    • Opmerking &ndash Wanneer serologie oorweeg word as 'n aanvulling tot NAAT vir diagnose, maksimeer die toetsing van drie tot vier weke na die aanvang van simptome die sensitiwiteit en spesifisiteit om vorige infeksie op te spoor.

    Agtergrond

    Sedert sy opkoms in Desember 2019, het die ernstige akute respiratoriese sindroom koronavirus 2 (SARS-CoV-2) meer as 21 miljoen bekende infeksies en byna 770 000 sterftes wêreldwyd veroorsaak [1]. Definitiewe diagnose van koronavirussiekte 19 (COVID-19), die siekte wat veroorsaak word deur SARS-CoV-2-infeksie, maak staat op die direkte opsporing van virusspesifieke RNA of virusspesifieke glikoproteïen-antigene in respiratoriese kanaalmonsters. Serologiese toetse wat die gasheer-teenliggaampeaksie op SARS-CoV-2 opspoor, kan ook help om die teenwoordigheid van huidige of vorige infeksie te bevestig deur bloedmonsters te gebruik.

    Coronavirus-genome kodeer vir vier belangrikste strukturele proteïene, insluitend spike (S), omhulsel (E), membraan (M) en nukleokapsied (N). Daar is getoon dat beide die S- en N-proteïene van SARS-CoV-2 immunogeen is by mense en huidige serologiese toetse teiken teenliggaampies wat teen hierdie antigene gerig is [2]. Die S-proteïen is die mees blootgestelde virale proteïen en is verantwoordelik vir virale aanhegting en toegang tot die gasheersel via binding aan die angiotensien-omskakelende ensiem 2 (ACE-2) reseptor [3]. Die S-proteïen bestaan ​​uit 'n N-terminale S1-subeenheid, betrokke by virus-reseptorbinding, en 'n C-terminale S2-subeenheid wat betrokke is by samesmelting met die gasheerselmembraan. Die S1-subeenheid word verder verdeel in die N-terminale domein (NTD) en 'n reseptorbindingsdomein (RBD). Daar is veral gefokus op die SARS-CoV-2 RBD vir entstofontwikkeling en geteikende teenliggaampieterapieë omdat neutraliserende teenliggaampies teen hierdie streek effektief virale toetrede blokkeer [4, 5]. Die N-proteïen is 'n RNA-bindende proteïen wat volop uitgedruk word tydens infeksie en speel 'n belangrike rol in RNA-transkripsie en replikasie [6].

    Daar is twee algemene tipes teenliggaampies, neutraliserende teenliggaampies (nAbs) en nie-neutraliserende (ook bekend as bindende teenliggaampies) [7]. Neutralisasie word gedefinieer as die verlies aan infektiwiteit wat plaasvind wanneer 'n nAb aan 'n virale deeltjie bind. Virusspesifieke of entstof-geïnduseerde nAbs kan 'n deurslaggewende rol speel in die beheer van virale infeksie, maar definitiewe data ontbreek om te weet of individue met waarneembare anti-SARS-CoV-2 nAbs teen herinfeksie beskerm word. In vergelyking word bindende teenliggaampies gekenmerk deur hul onvermoë om virale infeksie van permissiewe selle te voorkom. Ongeag hul funksie, beide tipes virus-spesifieke teenliggaampies is potensieel nuttig as diagnostiese aanwysers van huidige of vorige infeksie.

    Kommersieel beskikbare anti-SARS-CoV-2-teenliggaampietoetse gebruik verskillende tegnologieë om enkele immunoglobulienklasse (IgM, IgG of IgA) of totale teenliggaampies kwalitatief te meet, maar onderskei nie nAbs van bindende teenliggaampies nie. IgM-teenliggaampies gerig teen mikroörganismes word tipies eers na infeksie geproduseer en word gebruik as 'n maatstaf van onlangse infeksie. IgG-teenliggaampies ontwikkel gewoonlik later na IgM en bly vir maande tot jare na infeksie verhoog. Alhoewel IgM-teenliggaampies binne die eerste twee weke van simptome by sommige pasiënte opgespoor kan word, lyk SARS-CoV-2-infeksie ongewoon deurdat IgM en IgG meer algemeen saam styg, meer as twee weke na die aanvang van simptome [8]. Sekretoriese IgA is belangrik vir mukosale immuniteit. IgA kan ook sistemies opgespoor word in sekere tipes infeksie, insluitend SARS-CoV-2, maar relatief min is bekend oor die kinetika van IgA in bloed. Die komponente van &ldquototale teenliggaampies&rdquo sluit vermoedelik IgM en IgG en teoreties ook ander antigeen-spesifieke immunoglobuliene in.

    Aangesien die meerderheid van die bevolking voorheen aan seisoenale menslike koronavirusse (HCoV) blootgestel is, en hierdie virusse moontlik soortgelyke struktuur met SARS-CoV-2 kan deel, is 'n noodsaaklike deel van serologiese toetsontwikkeling en validering om te verseker dat die anti-SARS -CoV-2-teenliggaampies wat deur 'n gegewe toets opgespoor word, kruisreageer nie met ander koronavirusse nie (bv. HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 of HCoV-HKU1). Spesifisiteitstudies behels tipies die ontleding van geargiveerde sera wat verkry is voor die identifikasie van COVID-19 as 'n kliniese entiteit, sowel as assessering vir moontlike inmenging van stowwe soos outo-teenliggaampies of heterofiele teenliggaampies.

    Die mees algemene kliniese diagnostiese platforms wat vir SARS-CoV-2 gebruik word, sluit in laterale vloei (LF) toestelle, ensiemgekoppelde immunosorbenttoetse (ELISA) en chemiluminescerende immunotoetse (CIA). Laterale vloeitoetse vereis gewoonlik 'n druppel bloed (of serum of plasma) wat op 'n toetsstrook toegedien word, met resultate wat binne ongeveer 15-30 minute gelees word. Hierdie toestelle is geskik vir punt-van-sorg-toetsing en het potensiaal om in die veld ontplooi te word as deel van groot serologiese opnames. ELISA kom in 'n verskeidenheid verskillende formate.Tipies word 'n gebonde antigeen-teenliggaamkompleks opgespoor deur gebruik te maak van 'n tipe-spesifieke sekondêre teenliggaam gekoppel aan 'n substraat wat 'n kolorimetriese of fluoresserende sein genereer. CIA-metodes is soortgelyk aan ELISA, maar gebruik chemiese probes wat lig uitstraal in plaas van ensiematiese substrate. Beide ELISA en CIA is kliniese laboratorium-gebaseerde metodes wat verander kan word na hoë deursettoetsing deur gebruik te maak van serum, plasma of potensieel gedroogde bloedkolle. Op hierdie tydstip word neutralisasietoetse hoofsaaklik in navorsingsinstellings gebruik of as laboratoriumontwikkelde toetse deur verwysingslaboratoriums aangebied.

    In die Verenigde State vereis die Food and Drug Administration (FDA) tans Emergency Use Authorization (EUA) om 'n SARS-CoV-2-teenliggaamtoets te bemark. Dit beteken dat kommersiële vervaardigers en kliniese laboratoriums met laboratorium-ontwikkelde toetse prestasiedata aan die FDA moet indien vir hersiening. Vroeg in die pandemie was amptelike EUA-oorsig egter vrywillig. Daar is slegs van toetsontwikkelaars verwag om hul toetse intern te bekragtig en die FDA in kennis te stel van hul voorneme om te bemark. Gevolglik is die mark oorstroom met toetse wat swak presteer. In reaksie hierop het die FDA daarna 'n &ldquoverwyderde&rdquo-toetslys uitgereik wat toetse insluit waar beduidende prestasieprobleme geïdentifiseer is, toetse waarvoor amptelike EUA-oorsig nie behoorlik ingedien is nie of toetse wat vrywillig deur die ontwikkelaar teruggetrek is.

    Baie verskillende serologiese toetse vir SARS-CoV-2 het in 'n kort tydjie kommersieel beskikbaar geword. Die ongelooflike spoed van ontwikkeling het streng assesserings van toetsprestasie aansienlik verbygesteek. Daarom het IDSA 'n deskundige paneel byeengeroep om sistematies die beskikbare serologiese literatuur te hersien, saamgestelde skattings van toetsakkuraatheid te vergelyk en bewysgebaseerde aanbevelings vir ingeligte gebruik in kliniese praktyk te maak.


    Gevolgtrekkings

    Die vinnige ontwikkeling en implementering van 'n reeks diagnostiese toetse is ongetwyfeld 'n noodsaaklike deel van die gekoördineerde reaksie op 'n nuwe patogeen. Die beperkings van nuwe toetse en van klinici se begrip hiervan moet egter in ag geneem word. 4,5 Na ons kennis is dit die eerste studie om klinici se interpretatiewe reaksie op nuwe SARS-CoV-2-serologie te ondersoek. Daar is aansienlike beperkings op ons studie-ontwerp, beide in ons beskeie aantal opname-reaksies en die noodsaaklikheid vir vinnige ontwerp en implementering as gevolg van die ontwikkelende aard van die pandemie. Aangesien vrytekskommentaar opsioneel was, is ontleding hiervan ook beperk. Ons beklemtoon egter dat daar waarskynlik merkbare variasie in die kliniese interpretasie van SARS-CoV-2-serologieresultate sal wees soos dit beskikbaar word. Verdere navorsing op hierdie gebied is dringend geregverdig, aangesien dit ernstige implikasies kan hê vir voortgesette openbare gesondheidspogings om maatskaplike distansieringsmaatreëls te handhaaf en die isolasie van pasiënte wat deur COVID-19 geraak word. Proaktiewe interpretasie-ondersteuning, wat 'narratiewe kommentaar' van laboratorium- en aansteeklike siektespesialiste insluit, word sterk aanbeveel (Kassie 1).

    Voorbeelde van interpretatiewe opmerkings wat nuttig kan wees in die rapportering van SARS-CoV-2-serologie


    Ontwikkeling en validering van 'n serologiese toetspaneel vir die opsporing van Powassan-virusinfeksie in Amerikaanse pasiënte wat in streke woon waar Lyme-siekte endemies is

    FIG 1 Titrasie van monsters van akute-fase bosluisoorgedraagde siektes (TBD) in indirekte immunofluoressensietoets (IFA) om optimale siftingsverdunnings te bepaal. (a) Serial 2-voudige verdunnings van akute-fase TBD monster met Powassan virus (POWV) plaak vermindering neutralisasie toets (PRNT) titer van 1:320 om optimale sifting verdunning vir IgM IFA te bepaal. (b) Reeks 2-voudige verdunnings van akute-fase TBD monster met POWV PRNT titer van 1:160 om optimale sifting verdunning vir IgG IFA te bepaal.
    Voorbeeld
    geen.
    Resultaat vir toets:
    TBE-C OIE
    IgM
    POWV IFA
    IgM
    TBE-C OIE
    IgG
    POWV IFA
    IgG
    POWV PRNT90
    titer
    1+ND b ND≥1:401:5,120
    2+ND+≥1:401:640
    3+ND+≥1:401:2,560
    4ND≥1:20+≥1:401:320
    5+≥1:20ND≥1:401:5,120
    6ND≥1:20+≥1:1001:10,240
    7+ND+≥1:1001:40,960
    8NDNDNDND1:20
    9+≥1:20ND≥1:401:20

    Analitiese spesifisiteit.

    FIG 2 Geelkoorsvirus (YFV) entstof ontvanger plasmamonsters in Powassan virus (POWV) indirekte immunofluoressensie toets (IFA) om optimale siftingsverdunnings te bepaal om kruisreaktiwiteit uit te skakel. (Bo) YFV IgG-positiewe monster 7 jaar na inenting getoets teen 1:20 (links) en 1:40 (regs) verdunnings in IgG IFA. (Onder) YFV IgM-positiewe monster 4 weke na inenting getoets teen 1:10 (links) en 1:20 (regs) verdunnings in POWV IgM IFA.

    Serologiese toets

    Ons redakteurs sal nagaan wat jy ingedien het en bepaal of die artikel hersien moet word.

    Serologiese toets, ook genoem serologie toets of teenliggaam toets, enige van verskeie laboratoriumprosedures wat uitgevoer word op 'n monster bloedserum (die helder vloeistof wat van die bloed skei wanneer dit toegelaat word om te stol) met die doel om teenliggaampies of teenliggaamagtige stowwe op te spoor wat spesifiek in verband met sekere siektes voorkom. Daar is verskillende tipes serologiese toetse—byvoorbeeld flokkulasietoetse, neutralisasietoetse, hemagglutinien-inhibisietoetse, ensiemgekoppelde immunosorbenttoetse (ELISA's) en chemiluminesensie-immunotoetse.

    Onder flokkulasietoetse is komplementfiksasietoetse die algemeenste. Dit is gebaseer op die neerslag, of flokkulasie, wat plaasvind wanneer 'n teenliggaam en spesiaal voorbereide antigene (stowwe wat teenliggaamproduksie in die liggaam uitlok) saam gemeng word. Neutralisasietoetse hang af van die vermoë van 'n teenliggaam om die aansteeklike eienskappe van die aansteeklike organismes te neutraliseer. Hemagglutinien-inhibisie toetse is gebaseer op die vermoë van virusse om die rooibloedselle van sekere dierspesies te laat agglutineer (stol, of saamklonter) hierdie agglutinasie sal deur die teenliggaam voorkom word. ELISA's maak gebruik van fluoresserende, lig- (chemiluminescerende) of kolorimetriese seinopsporing, die seine word geproduseer deur ensiematiese reaksies wat plaasvind tydens die opsporing en kwantifisering van 'n spesifieke antigeen of teenliggaam in 'n oplossing. Chemiluminescensie-immunotoetse is gebaseer op die opsporing van ligseine wat deur chemiese reaksies tussen ensieme of chemiese probes wat aan teenliggaampies bind, uitgestraal word.

    Serologiese toetse is veral nuttig in die diagnose van sekere bakteriële, parasitiese en virale siektes, insluitend Rocky Mountain-vlekkoors, griep, masels, polio, geelkoors en aansteeklike mononukleose. Dit is ook nuttig in die opsporing van outo-teenliggaampies (skadelike teenliggaampies wat komponente van die liggaam aanval) wat betrokke is by outo-immuun siektes, soos rumatoïede artritis. As 'n praktiese instrument vir massasifting, het serologiese toetse waardevol bewys in die opsporing van siektes soos sifilis, MIV/VIGS, en epidemiese en pandemiese aansteeklike siektes (bv. griep en koronavirussiekte). Sien ook bloed analise.

    Die Redaksie van Encyclopaedia Britannica Hierdie artikel is mees onlangs hersien en bygewerk deur Kara Rogers, Senior Redakteur.


    Agtergrond

    Infeksie met ernstige akute respiratoriese sindroom koronavirus 2 (SARS-CoV-2) begin 'n humorale immuunrespons wat teenliggaampies teen spesifieke virale antigene produseer soos die nukleokapsied (N) proteïen en piek (S) proteïen, wat spesifieke anti-S proteïen teenliggaampies insluit wat die spike&rsquos S1-proteïensubeenheid en reseptorbindingsdomeine (RBD) teiken. Serologiese toetse kan die teenwoordigheid van hierdie teenliggaampies in serum binne dae tot weke na akute infeksie opspoor. Serologiese toetse moet egter nie gebruik word om akute SARS-CoV-2-infeksie te diagnoseer nie. Serologiese toetse kan persone identifiseer met 'n herstel of verlede SARS-CoV-2-infeksie en sodoende wetenskaplikes en openbare gesondheidskundiges help om die epidemiologie van SARS-CoV-2-individue en bevolkings met 'n groter risiko van infeksie beter te verstaan. Alhoewel die immuunkorrelate van beskerming nie ten volle verstaan ​​word nie, dui bewyse daarop dat teenliggaamontwikkeling na infeksie waarskynlik 'n mate van immuniteit verleen teen daaropvolgende infeksie vir ten minste 6 maande. Dit is egter nie bekend in watter mate opkomende virale variante immuniteit teen daaropvolgende infeksie kan beïnvloed nie.


    Padblokkades vir sukses

    Bekommernisse oor akkuraatheid en vrae oor magtigingsriglyne het huiwering veroorsaak onder kliniese laboratoriums wat serologietoetse uitvoer. Baie van hierdie onsekerheid is gebaseer op beperkte data. Ironies genoeg skep die direkte toepassings van serologietoetsing inherente padblokkades om hierdie vrae te beantwoord. Wanneer laboratoriums intydse besluite neem oor die toewysing van hulpbronne, tyd en kundigheid, is die feit dat serologietoetsing nie bedoel is vir diagnostiese gebruik nie, 'n impak. Hospitaallaboratoriums moet die identifisering van akute siektegevalle prioritiseer om die verspreiding van siektes te beperk en effektiewe behandeling vir kritiek siek pasiënte te bied. Kortom, toesigstudies is nuttig vir epidemiologiese doeleindes, maar nie die eerste prioriteit in triage-situasies nie. Dit is hoekom serologietoetse tans hoofsaaklik in groot kliniese laboratoriums en navorsingsfasiliteite uitgevoer word.

    Dit is dus waardevol om af te sluit met 'n opsomming van die huidige aanbevole gebruike vir serologietoetsing.

    Wanneer COVID-19-serologietoetsing gebruik moet word

    • Die primêre toepassing van serologietoetsing is die identifikasie van individue wat voorheen met SARS-CoV-2 besmet is. Hierdie kennis kan gebruik word om epidemiologie en seroprevalensiestudies te lei, asook om kontakopsporing te fasiliteer.
    • Serologietoetse kan ook gebruik word om potensiële herstelplasmaskenkers te identifiseer en om die immuunrespons op kandidaat-entstowwe te evalueer.
    • Uiteindelik is daar potensiaal vir serologietoetse om te help met die diagnose van COVID-19 by RT-PCR-negatiewe pasiënte wat later tydens die siekteverloop verskyn.

    Wanneer COVID-19-serologietoetse NIE gebruik behoort te word nie

    • Serologietoetse moet nie gebruik word om akute of onlangse gevalle van COVID-19 te diagnoseer nie.
    • Op hierdie tydstip kan serologietoetse nie gebruik word om definitief te bepaal of 'n pasiënt beskermende immuniteit ontwikkel het nie.
    • As gevolg van die bogenoemde beperkings, moet SARS-CoV-2-serologietoetse nie gebruik word om persoonlike beskermende toerusting (PPE) of die nakoming van sosiale distansiëringspraktyke te lei nie.

    &ldquoIn afwesigheid van goedgekeurde en bewese terapieë, word diagnostiek besonder belangrik,&rdquo het dr Bertuzzi gesê. &ldquo70% van dokters&rsquo-besluite is gebaseer op toetse wat in die laboratorium uitgevoer is.&rdquo Maar ons moet voortgaan om versigtig te wees.

    &ldquoOns moet duidelik wees oor waarvoor toetsing is, en ons moet die versigtige wetenskap doen om nie onnodig die hulpbronne wat ons ontwikkel het, te mors nie,&rdquo het dr Gerberding bygevoeg. &ldquoOns&rsquor nêrens naby kudde-immuniteit nie, so ons moet ander oplossings vind om ons ekonomie weer te begin.&rdquo Die Amerikaanse Vereniging vir Mikrobiologie het stap-vir-stap prosedures ontwikkel om laboratoriums te help om doeltreffende en effektiewe verifikasieprotokolle vir COVID-19-serologiese toetse te ontwikkel.


    Lab 17: Serologie, Direkte en Indirekte Serologiese Toetsing - Biologie

    Ons het die doeltreffendheid van diagnostiese toetse vir anaplasmose prospektief ondersoek deur pasiënte met vermoedelike diagnoses in Frankryk te gebruik. PKR (sensitiwiteit 0.74, spesifisiteit 1) was die mees geskikte toets. Serologie het 'n laer spesifisiteit maar hoër sensitiwiteit gehad wanneer akute en herstelmonsters getoets is. PCR en serologie moet in kombinasie gebruik word vir anaplasmose diagnose.

    Menslike granulositiese anaplasmose (HGA) is 'n bosluisgedraagde intrasellulêre bakteriële infeksie wat veroorsaak word deur Anaplasma phagocytophilum. Die siekte is teenwoordig in Noord-Amerika, Europa en Noord-Asië, gebiede met Ixodes ricinus bosluise, die primêre vektor vir oordrag na mense (1,2). Kliniese manifestasies van die siekte sluit in akute koors, hoofpyn en mialgie wat 2-3 weke na bosluisbyt voorkom. Diagnose vereis die isolasie van A. phagocytophilum in bloedkultuur, die teenwoordigheid van morulae in polimorfonukleêre selle na Mei Grünwald-Giemsa-kleuring van perifere bloedsmere, positiewe serologiese resultate (seroomskakeling of hoë titer van spesifieke teenliggaampies), of 'n positiewe A. phagocytophilum PCR resultaat. Die May Grünwald-Giemsa vlektoets het 'n lae sensitiwiteit (3) PKR en serologie is meer algemeen beskikbaar, maar die diagnostiese waarde daarvan is nie goed gevestig nie. Die doel van ons studie was om die diagnostiese waardes van die beskikbare mikrobiologiese toetse te vergelyk in 'n prospektief geselekteerde reeks pasiënte met kliniese tekens en simptome wat ooreenstem met 'n HGA-diagnose.

    Die studeerkamer

    In hierdie voornemende, multisentrumstudie het ons simptomatiese pasiënte ingeskryf wat in Elsas woon, 'n streek van noordoos-Frankryk waar bosluisoordraagbare siektes hoogs endemies is. Pasiënte het skriftelike, ingeligte toestemming gegee om aan ons studie deel te neem, wat deur die etiese komitee van die Universiteitshospitaal van Straatsburg (Stratsburg, Frankryk) goedgekeur is.

    Ons het pasiënte ingesluit as hulle 1 van die volgende kombinasies van tekens en simptome gehad het wat nie meer as 4 weke na 'n bosluisbyt voorkom nie: 1) koors of ander simptoom wat vermoedelik verband hou met 'n bosluisbyt, 2) koors plus trombositopenie met of sonder leukopenie of verhoogde lewerensiemvlakke, 3) trombositopenie met of sonder leukopenie, of 4) verhoogde lewerensiemvlakke sonder koors. Die eerste besoek het kliniese en epidemiologiese evaluasies en die versameling van bloedmonsters vir A. phagocytophilum serologie, Mei Grünwald-Giemsa-kleuring, en A. phagocytophilum-spesifieke PCR. Ons het nie kultuur vir A. phagocytophilum. 'n Etiologiese ondersoek is ook uitgevoer om 'n differensiële diagnose te verkry. Na > 4 weke is 'n tweede besoek geskeduleer om 'n kliniese evaluering te verkry, A. phagocytophilum serologie, en (indien nodig) 'n volledige differensiële diagnose.

    Ons het pasiënte in 3 groepe gestratifiseer op grond van hul diagnose. Een groep het kontroles ingesluit, wat pasiënte was met 'n kliniese en mikrobiologies bevestigde nonanaplasmose-diagnose. Die tweede groep het anaplasmose-pasiënte ingesluit wat deur > 1 van die volgende kriteria gedefinieer is: intraleukosietmorulae op bloedsmere, 'n positiewe PCR-resultaat vir Anaplasma, 'n 4-voudige verhoogde teenliggaamtiter vir A. phagocytophilum in die opvolgmonster of 'n sero-omskakeling (d.w.s. verandering in teenliggaamtiter van negatief in eerste monster na > 1:64 in tweede monster), of 'n hoë teenliggaamtiter vir Anaplasma (> 1:256) deur indirekte immunofluoressensie-teenliggaampies. Die derde groep was pasiënte sonder enige diagnose.

    Ons het DNA-ekstraksie, PCR en serologiese toetse uitgevoer, blind vir monster-identifikasie soos voorheen beskryf (4). Die PCR het die A. phagocytophilum msp2/p44 geen. Ons het serologiese toetse uitgevoer met behulp van die Anaplasma phagocytophilum IFA IgG-toets (Focus Diagnostics, http://www.focusdx.com) (4). Opgeleide personeel het May Grünwald-Giemsa-gekleurde smeerpreparate van volbloedmonsters vir intrasellulêre morulae ondersoek. Ons het data ingesamel deur EpiData weergawe 3.1.2701.2008 (http://epidata.dk) te gebruik en data na Excel-sigblaaie (Microsoft, https://www.microsoft.com) vir ontleding onttrek. Na pasiënt stratifikasie het ons die sensitiwiteit en spesifisiteit van die verskillende diagnostiese toetse beraam.

    Figuur. Verspreiding van positiewe diagnostiese toetsresultate vir pasiënte met bevestigde menslike granulositiese anaplasmose, Frankryk, Mei 2010–Julie 2012.

    Gedurende Mei 2010-Julie 2012 het ons 155 pasiënte by die studie ingeskryf, van wie 25 nie die tweede besoek voltooi het nie. Nie een van hierdie 25 pasiënte het 'n positiewe PCR-resultaat of 'n teenliggaamtiter > 1:256 by die eerste besoek gehad nie. Die oorblywende 130 pasiënte het beide studiebesoeke voltooi en is dus by die studie-evaluering ingesluit. Van hierdie 130 pasiënte het 19 bevestigde anaplasmose diagnoses gehad en 36 was kontroles met bevestigde nonanaplasmose diagnoses (infeksies met Borrelia burgdorferi, Epstein-Barr-virus, sitomegalovirus, MIV, bosluisgedraagde enkefalitisvirus, Leptospira spp., Babesia spp., parvovirus B19, hantavirus, Francisella tularensis, Plasmodium spp., en Aeromonas spp.). Van die pasiënte met HGA het 84.2% (16/19) aan die serologiese kriteria voldoen en 73.7% (14/19) aan die PKR-kriteria (Tabel Figuur). Koors, die mees algemene simptoom (89%), is geassosieer met gewrigspyn en spierpyn. Sitopenie van bloedplaatjies, neutrofiele, of beide (74%) en verhoogde lewerensiemvlakke (63%) was gereeld teenwoordig.

    Berekeninge van die diagnostiese waarde van elke toetsmetode het getoon dat PCR 'n sensitiwiteit van 0,74 en 'n spesifisiteit van 1 het en bloedsmeerkleuring het 'n sensitiwiteit van 0,21 en 'n spesifisiteit van 1. Seroomskakeling of 'n 4-voudige verhoging van teenliggaampies het 'n sensitiwiteit van 0.32 en spesifisiteit van 0.97, 'n teenliggaamtiter > 1:256 het 'n sensitiwiteit van 0.58 en spesifisiteit van 0.97 gehad, en algehele serologie het 'n sensitiwiteit van 0.84 en spesifisiteit van 0.97 gehad.

    Die interval tussen die eerste en tweede serologiese toetse vir die meeste pasiënte in die anaplasmose-groep was 4-8 weke (gemiddeld 49,8 dae). Vyf pasiënte het die tweede toets >8 weke na die eerste gehad. Van hierdie pasiënte het 2 sero-omgeskakel, 1 het 'n aansienlike afname in teenliggaampies ervaar, 1 het 'n aansienlike verhoging in week 12 ervaar, en 1 het 'n stabiele teenliggaamtiter gehad.

    Ons studie bevestig PCR as die goue standaard vir diagnose van HGA hierdie toets het vinnige diagnose tydens die akute stadium van infeksie moontlik gemaak met goeie sensitiwiteit en uitstekende spesifisiteit. Die afwesigheid van 'n goue standaard diagnostiese toets om ons resultate mee te vergelyk, is egter 'n beperking op ons studie. A. phagocytophilum kultuur is die verwysingstoets vir HGA-diagnose (5,6) maar is nie goed geskik vir roetinegebruik nie, want verbouing is tydrowend en nie wyd uitgevoer nie. Die diagnose van anaplasmose behels dikwels 'n assessering vir die teenwoordigheid van morulae, maar hierdie toets het 'n lae sensitiwiteit (3). In ons studie was hierdie toets van beperkte waarde vir HGA-diagnose, want wanneer morulae op bloedsmere opgespoor is > 1 van die ander diagnostiese toetse was positief. May Grünwald-Giemsa-kleuring is egter die vinnigste toets om te doen, en wanneer dit deur opgeleide personeel uitgevoer word, is positiewe resultate nuttig vir dokters.

    In die kliniese praktyk berus die diagnose van HGA dikwels op serologie (79), maar 2 beperkings word met hierdie metode geassosieer: 'n risiko vir vals-negatiewe resultate tydens die akute stadium van infeksie omdat A. phagocytophilum teenliggaampies word gemiddeld 11,5 dae na simptoomaanvang opgespoor en 'n risiko vir vals-positiewe resultate omdat Anaplasma teenliggaampies is waarneembaar in 86,4% van pasiënte vir 6-10 maande en in 40% van pasiënte tot 2 jaar na die aanvanklike infeksie (10). Positiewe serologiese kriteria is seroomskakeling, 'n 4-voudige verhoging in teenliggaamtiter, of 'n stabiele en hoë teenliggaampie titer (11,12). In ons studie het ons opgemerk dat elk van hierdie kriteria kan lei tot verkeerde diagnose aan die begin van infeksie, soos voorheen gerapporteer (13).

    PCR word beskou as die mees effektiewe diagnostiese metode in die vroeë stadium A. phagocytophilum infeksie (14,15). Ons resultate bevestig hierdie oortuiging, ten spyte van ons beperking van 'n klein studiepopulasie. As PCR egter alleen gebruik word, kan HGA ondergediagnoseer word.

    Gevolgtrekkings

    Die voorstelling van koors by 'n pasiënt met 'n geskiedenis van bosluisbyt kwalifiseer nie vir 'n anaplasmose-diagnose nie. Mikrobiologiese toetse moet uitgevoer word. Vir anaplasmose blyk PCR-toetsing die doeltreffendste diagnostiese hulpmiddel te wees. Die sensitiwiteit van PCR is egter <100%, en die kombinasie van PCR met serologiese toetsing by die eerste besoek blyk die beste strategie te wees vir vroeë diagnose van akute anaplasmose. In gevalle van hoë vermoede vir HGA by pasiënte sonder enige diagnose by die eerste besoek, kan 'n tweede serologiese toets > 4 weke later nuttig wees. 'n Multipleksbenadering kan ook in sulke gevalle gebruik word om na differensiële diagnoses te soek.

    Dr Hansmann is hoof van die departement van aansteeklike siektes by die Straatsburg Universiteitshospitaal, Straatsburg, Frankryk, 'n lid van die Borreliosis-groep van die Europese Vereniging vir Kliniese Mikrobiologie en Aansteeklike Siektes en betrokke by die ontwerp van die nasionale diagnose en gesondheidsplan vir bosluisoordraagbare siektes vir Frankryk. Sy navorsingsbelangstellings is bosluisoordraagbare siektes en diagnose.

    Erkenning

    Hierdie studie is ondersteun deur die Franse Hospitaal Kliniese Navorsingsprogram (PHRC HUS 2007–3960).


    Kyk die video: Ateities planai: ar tavo tėvai galvoja taip pat kaip ir tu? (Oktober 2022).