Inligting

Sondeversterking in MLPA

Sondeversterking in MLPA



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ek lees 'n artikel oor MLPA (Multiplex ligation-dependent probe amplification) en ek het vasgehaak by hierdie sin:

Die voordeel van die verdeling van die sonde in twee dele is dat slegs die geligeerde oligonukleotiede, maar nie die ongebonde sonde-oligonukleotiede nie, geamplifiseer word.

Die beginsel wat ek nie verstaan ​​nie, is hoekom sal die ongeligeerde oligonukleotiede nie geamplifiseer word nie? Soos my huidige begrip van die PCR is, moet die primers normaalweg uitgloei en fragmente produseer wat aan die einde van 'n oligonukleotied (by die "ligasie-plek" sal eindig - dus sal hulle korter wees, maar hulle moet daar wees), is ek verkeerd ?


Ek werk vir MRC-Holland, die ontwikkelaar van MLPA, en wat Kacper verduidelik, is inderdaad die geval. Enige RPO (regter probe oligo) wat nie geligeer is nie, word ook geamplifiseer in die MLPA reaksie, aangesien die omgekeerde primer aan die primer bindingsplek van die RPO kan bind. EGTER, aangesien hierdie ongeligeerde RPO-oligo die bindingsplek vir die (fluorescent-gemerkte) voorwaartse primer HET, eindig die amplifikasie hier. GELIGEERDE probes, daarenteen, bevat die bindingsplek vir BEIDE primers, en word dus eksponensieel geamplifiseer. Verder word die fluoresserende etiket slegs in die amplikone geïnkorporeer wat voortspruit uit geligeerde probes.


Ek veronderstel ongeligeerde oligonukleotied sal ook "geamplifiseer" wees, maar op baie minder skaal (?net een deel van sonde?). Byvoorbeeld, na die 6de lopie van PCR sal jy 2^6=64 amplikone van geligeerde sonde kry, maar slegs 6 vir een ongeligeerde deel (?tweede aansitter is ontwerp om aan die tweede deel van antisense oligonukletied van sonde te gloei?). Na 30 lopies is daar groot verskille wat jou toelaat om net behoorlik geligate sonde op te spoor. Ek is nie seker of ek reg is nie, maar dit is hoe ek dit verstaan ​​het. Vrede :)